烧伤脓毒症大鼠骨骼肌消耗与凋亡之间的关系研究

论文摘要

临床观察发现,严重烧伤后患者往往出现骨骼肌组织显著性高蛋白分解代谢,如果合并全身性感染,这种代谢反应将更为剧烈,使机体陷入严重的低蛋白血症和负氮平衡。骨骼肌作为人体最大的氮库,其大量消耗将严重影响患者的预后。但目前关于烧伤、脓毒症骨骼肌组织萎缩和消耗的分子机制尚不清楚。 研究目的:系统地研究烧伤和烧伤脓毒症状态下大鼠不同类型骨骼肌组织中凋亡相关蛋白的转录表达变化,采用无细胞分析caspase-3在骨骼肌组织消耗中的作用及其与在蛋白代谢中发挥重要作用的ubiquitin-proteasome（泛素-蛋白酶体）蛋白降解途径间的关系,初步探讨骨骼肌蛋白消耗与凋亡的关系,以及caspase-3在骨骼肌蛋白消耗中的地位,从一个新的角度认识降解烧伤和烧伤脓毒症骨骼肌消耗的机理及其可能的调控途径,为临床调控骨骼肌消耗和萎缩提供理论依据。 材料和方法:雄性Wistar大鼠288只,体重60-70克,随机分成二组:（1）单纯烧伤组（B组,n=120）,在大鼠背部100℃沸水持续12s造成30%Ⅲ°烫伤,伤后立即给予腹腔注射5%糖盐水40ml/kg复苏:（2）烧伤合并内毒素攻击组（B+L组,n=120）,烧伤后腹腔注射内毒素10mg/kg。分别于烧伤和/或内毒素注射后6h、1d、4d、7d和14d五个时间点（每个时间点实验动物24只,含正常对照12只）活杀后,无菌留取大鼠伸趾长肌和比目鱼肌标本,应用RT-PCR方法测定不同类型骨骼肌组织中Akt、Bcl-2、Caspase-3转录表达。借助离体培养的骨骼肌细胞和无细胞系统,采用氨基酸全谱测定给予caspase-3激活剂（stauroporine）或抑制剂（DEVD）以及蛋白酶体抑制剂（Lactacystin）对骨骼肌蛋白降解率的变化和14kDa-actin小分子蛋白表达变化。

论文目录

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• 正文
• 前言
• 材料和方法
• 1.主要试剂及配制
• 1.1 RT-PCR相关试剂
• 1.2 细胞培养相关试剂
• 1.3 Western Blot相关试剂
• 2.主要仪器
• 3.在体实验
• 3.1 实验动物
• 3.2 动物模型
• 3.3 动物分组
• 3.4 组织标本采集
• 3.5 指标测定及方法
• 4.离体实验
• 4.1 骨骼肌细胞培养
• 4.2 离体实验实验设计
• 5.统计学处理
• 实验结果
• 1.烧伤组核酸转录变化
• 2.烧伤脓毒症组核酸转录变化
• 3.体外caspase-3对actomyosin复合体的影响
• 4.caspase-3及其抑制剂对骨骼肌细胞蛋白降解的影响
• 5.caspase-3消化后actomyosin对骨骼肌细胞蛋白降解的影响
• 6.caspase-3和泛素途径活化或抑制后对蛋白降解的影响
• 7.caspase-3抑制剂对肌组织蛋白降解的影响
• 8.IGF-1和胰岛素对骨骼肌细胞蛋白降解率的影响
• 讨论
• 1.研究基础
• 2.烧伤和烧伤脓毒症刺激对不同类型骨骼肌凋亡相关因子转录表达的影响及意义
• 3.caspase-3与泛素-蛋白酶体途径的时相关系
• 4.总结
• 参考文献
• 附录1：照片
• 附录2：文献综述
• 附录3：发表文章和成果
• 致谢