论文摘要
本研究以黄瓜WD3×B-2-2构建了F2杂交群体,采用BSA(Bulked Segregant Analysis)法结合SRAP(Sequence-related Amplified Polymorphism, SRAP,序列相关扩增多态性)分子标记技术,寻找与黄瓜果皮绿色性状相关的分子标记。研究结果如下:以绿皮黄瓜“WD3”和白皮黄瓜“B-2-2”为父母本杂交得到Fl代,Fl代经自交得到F2代,F2代种植123株。对F2代单株上所有果实果皮进行叶绿素含量的测定,根据果皮叶绿素含量将叶绿素含量在0.070.08 mg·kg-1确定为绿皮株,叶绿素含量在0.005 mg·kg-1以下的确定为白皮株。得到绿色果皮植株94株,白色果皮植株29株。绿皮株和白皮株的比例接近3:1,说明绿皮相对于白皮为完全显性。采用改良的CTAB(三甲基十六烷基溴化铵法),以黄瓜幼嫩叶片为材料提取黄瓜基因组DNA,经1%琼脂糖凝胶电泳检测,结果表明提取的DNA条带完整、质量好。采用集群分离分析法(BSA)按DNA浓度将10株纯绿皮株等量混合,构建绿皮DNA池;将10株白皮株等量混合构建白皮DNA池。用380条SRAP随机引物对黄瓜的绿皮池和白皮池进行扩增,其中具有差异带(绿皮植株有而白皮植株没有的)的引物共有2对。用上述2对引物对F2代单株进行验证,最终确定所获得的2个多态性标记,即ME9EM1-309和ME8EM14-425,它们都能扩增出与绿色性状相关的标记。它们对F2群体色泽验证的符合率分别为93.4%和96%。经JOINMAP3.0计算,ME9EM1-309与黄瓜果皮绿色基因的遗传距离为6cM。ME8EM14-425与黄瓜果皮绿色基因的遗传距离为8.3cM。将获得的特异片段进行回收、克隆和测序。目标条带与载体连接和转化后,进行菌落PCR检测,结果表明,此标记转化菌株的插入片断和目的片断大小一致,说明所克隆是目的片断。采用Blast软件在GeneBank数据库中进行查询,未发现与所获得的两个标记片段相似性高于20%的序列,说明这两个片段为新发现的黄瓜DNA序列。本文运用分子生物学SRAP分子标记的方法,对黄瓜果皮色绿色性状进行标记和研究,为今后黄瓜种质资源的早期鉴定及新品种的选育等提供理论依据。
论文目录
摘要ABSTRACT第一章 文献综述1.1 我国黄瓜生产的现状1.2 黄瓜品种的选育1.2.1 我国黄瓜品种选育的发展历史1.2.2 黄瓜育种的技术1.3 分子标记1.3.1 分子标记的种类1.3.1.1 基于DNA-DNA 杂交技术的分子标记1.3.1.2 基于PCR 技术的分子标记1.3.1.3 基于PCR 技术与限制性酶切技术的分子标记1.3.1.4 基于单核苷酸多态性的分子标记1.3.1.5 SRAP 分子标记的原理及其技术应用1.3.2 AFLP 分子标记技术的原理1.3.3 SCAR 分子标记的原理及其技术应用1.4 寻找目标性状基因连锁的分子标记的方法1.4.1 遗传连锁图法1.4.2 近等基因系法与BSA 法1.5 寻找目标性状基因连锁的分子标记的目的1.5.1 标记辅助选择1.5.2 基因克隆1.6 遗传分离规律的发现和应用1.7 分子标记在黄瓜研究中应用及进展1.7.1 遗传多样性分析和种质资源鉴定1.7.2 分子标记辅助选择1.7.3 品种纯度鉴定1.8 关于果皮色泽遗传及分子标记的研究进展1.9 本研究的目的意义和总体思路1.9.1 目的意义1.9.2 主要研究内容1.9.3 试验技术路线第二章 材料与方法2.1 实验材料及仪器2.1.1 黄瓜供试材料2.1.2 主要仪器及试剂2.2 实验方法2.2.1 田间试验2.2.2 果实皮色的考察和记载方法2.2.3 总DNA 的提取2.2.4 基因组DNA 模板的提取步骤2.2.5 DNA 池的构建2.2.6 PCR 程序2.2.7 PCR 程序2.2.8 电泳、染色和凝胶分析2.2.8.1 聚丙烯酰胺凝胶的制备2.2.8.2 PCR 产物电泳分离2.2.8.3 凝胶染色2.2.8.4 数据的收集与编码2.2.8.5 连锁分析第三章 结果分析3.1 黄瓜果皮绿色的遗传分析3.2 DNA 的提取与质量检测结果3.3 SRAP 标记的遗传研究3.3.1 SRAP 引物的筛选3.3.2 SRAP 标记在BSA 池及F2 单株中的表现及分离3.4 目的条带的回收3.5 讨论3.5.1 黄瓜DNA 模板3.5.2 SRAP 在黄瓜果皮颜色标记中的应用第四章 结论4.1 关于黄瓜绿色果皮的性状的遗传4.2 基因组DNA 的提取4.3 SRAP 分子标记4.4 所得片段的回收和测序第五章 设想和展望参考文献附录致谢作者简介
相关论文文献
标签:黄瓜论文; 绿皮性状论文; 标记论文;