阳和汤治疗乳腺癌的可行性实验研究

论文摘要

目的:鉴于清代著名医家王洪绪和马培之对阳和汤能否治疗乳岩（乳腺癌）持不同观点,故开展本实验。通过体内实验——对断乳昆明小鼠的子宫实验来探讨阳和汤有无类雌激素样作用;通过体外实验探讨阳和汤大鼠含药血清对人类乳腺癌雌激素受体阳性细胞MCF-7和人类乳腺癌雌激素受体阴性细胞MDA-MB-231的增殖抑制作用,并通过流式细胞仪检测细胞周期分布和细胞凋亡,进而探讨阳和汤用于治疗乳腺癌的可行性。方法:1体内实验:昆明种清洁级雌性断乳小鼠100只,10～12克,随机分为10组,每组10只,称重并记录。7个中药组以7种不同浓度的阳和汤水煎剂灌胃,分别为以0.5g/kg、1g/kg、2g/kg、4g/kg、7.5g/kg、15g/kg、30g/kg。阳性对照组予补佳乐（戊酸雌二醇片简称E2）生理盐水溶液灌胃,分大、小两个剂量组,E2小剂量组为0.28mg/kg、E2大剂量组为0.56mg/kg。阴性对照组仅以等量生理盐水灌胃。以上各组小鼠灌胃均每日一次,连续10天,于第11天称重后脱颈椎处死小鼠,剥离子宫和卵巢并称重,记录。2体外实验:按文献方法制备六组大鼠含药血清,分别为:阳和汤低剂量组（4.5g/kg）、中剂量组（9g/kg）、高剂量组（18g/kg）、CTX组（70mg/kg.d）、雌二醇组（0.17mg/kg）、生理盐水组。选择人类乳腺癌雌激素受体阳性细胞MCF-7和人类乳腺癌雌激素受体阴性细胞MDA-MB-231,采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测这六组含药血清在不同时间组（24h～120h）分别对MCF-7细胞和MDA-MB-231细胞增殖的影响。流式细胞术测定低、中、高三个剂量组的阳和汤大鼠含药血清对MCF-7细胞和MDA-MB-231细胞作用48h后的细胞周期分布及细胞凋亡的影响。结果:1体内试验（子宫实验）结果各中药组小鼠子宫、卵巢湿重及其各自脏器系数均小于生理盐水组,差异有统计学意义（p<0.01）。随着中药剂量由小到大,子宫、卵巢湿重及其脏器系数呈现递减趋势,它与阳和汤剂量之间,具有剂量-效应关系（子宫r=-0.8198负相关P=0.0240<0.05差异有统计学意义;卵巢r=-0.8979负相关P=0.0060<0.01差异有统计学意义。）说明阳和汤无类雌激素样作用,相反呈现出抑制小鼠子宫和卵巢生长发育的作用趋势,在一定的剂量范围内,存在量-效负相关。2体外实验结果2.1细胞形态学观察结果:不同浓度的阳和汤含药血清作用于MCF-7细胞48h之后,凋亡细胞即可出现,呈现细胞体积缩小,核固缩,染色质呈斑块状,凝集,碎裂。96h后细胞变化最明显,凋亡细胞增多,从瓶壁脱落,且随着药物血清浓度增大,与空白对照组相比,实验组中MCF-7细胞数量逐渐减少。不同浓度的阳和汤含药血清作用于MDA-MB-231细胞后,24h内变化不明显,之后,细胞渐渐收缩呈纺锤状,或圆形,72h左右变化最明显,贴壁细胞减少,脱落细胞增多,细胞体积缩小,密度增加,核固缩,核染色质固缩,细胞增殖受到抑制,且随着药物浓度的增大,细胞数量逐渐减少。上述细胞形态学改变与MTT结果趋势相同。2.2 MTT比色法检测各组药物血清对MCF-7细胞和MDA-MB-231细胞生长曲线的影响各组药物血清组细胞生长曲线近似为“S”形,跟生理盐水组比较,中药小、中、大剂量组、CTX组对细胞生长曲线影响依次由小到大,使细胞生长曲线下降的程度亦由小到大。E2组使MCF-7细胞生长曲线明显上升。其中,MDA-MB-231细胞72h之前中药大剂量组使曲线下降的幅度大于CTX组,72h之后,CTX组大于中药大剂量组。2.3 MTT比色法检测各组药物血清对MCF-7细胞和MDA-MB-231细胞的杀伤作用用MTT比色法分析,小、中、大三个剂量组的阳和汤含药血清对MCF-7细胞有一定的增殖抑制作用;对MDA-MB-231细胞有显著的增殖抑制作用,且均有明显的剂量-时间依赖关系。从24h～120h,中药剂量由小至大,对MCF-7细胞抑制率由1.47%～11.06%增至6.29%～20.01%,对MDA-MB-231细胞抑制率由15.45%～20.19%增至21.24%～45.79%。2.4流式细胞仪检测阳和汤含药血清处理MCF-7细胞和MDA-MB-231细胞48h后细胞周期分布和凋亡的结果两种细胞分别与空白组比较,阳和汤各含药血清组随着药物剂量的加大,G0/G1期细胞逐渐增多,而各组的S期细胞和G2/M期细胞则逐渐减少,增殖指数PI值亦逐渐减少。但MCF-7细胞各中药组与空白组比较无统计学意义（P>0.05）;MDA-MB-231细胞中、高剂量组与空白组的G0/G1期数值和PI值比较差异有统计学意义（P<0.01）。结果显示阳和汤含药血清可阻滞MCF-7细胞和MDA-MB-231细胞周期于G0/G1期,该作用呈一定的剂量依赖性,但对MDA-MB-231细胞的作用要强于MCF-7细胞。细胞凋亡结果显示:两种细胞经各阳和汤含药血清组处理48h后,流式细胞仪测得的典型亚二倍体凋亡峰,随中药剂量的增大而逐渐升高。MCF-7细胞空白对照组、低、中、高中药组的凋亡率依次为为0.68%、2.36%、3.61%、10.75%,MDA-MB-231细胞凋亡率依次为3.93%、6.86%、16.89%、39.54%,可见随阳和汤剂量的增大,凋亡的MCF-7细胞和MDA-MB-231细胞逐渐增多,两种细胞的中、高剂量组与空白对照组比较,差异有统计学意义（P<0.01）,但是对MDA-MB-231细胞的抑制率要明显高于MCF-7细胞。结论:1阳和汤无类雌激素样作用,相反能抑制断乳小鼠子宫和卵巢的生长发育,在一定的剂量范围内,呈量-效负相关。2阳和汤对MCF-7细胞和MDA-MB-231细胞均有抑制作用,呈剂量和时间依赖性,并能影响细胞周期分布,诱导肿瘤细胞凋亡。但是阳和汤对ER（-）的MDA-MB-231细胞的抑制和杀伤作用远比对ER（+）的MCF-7细胞的作用要强。3阳和汤可以运用于乳腺癌的治疗,但是更适用于ER（-）的乳腺癌患者。

论文目录

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• 研究论文 阳和汤治疗乳腺癌的可行性实验研究
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 附图
• 附表
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述
• 参考文献
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