对映—贝壳杉烯二萜Wangzaozin A对人胃腺癌细胞SGC-7901生长的影响及诱导凋亡的初探

论文摘要

癌症是严重危害人类健康的主要疾病之一,攻克癌症一直是世界瞩目的研究课题。癌症发生是一个复杂的过程,是一种无控的细胞增殖和凋亡抑制的混合疾病。绝大数癌细胞因为周期调控机制的变异,使得它们的周期进程失控,从而具有了无控生长的优势,而细胞凋亡是一种保护细胞免遭癌基因驱动的细胞恶性增殖的主要机制。已经发现大部分的化疗药物都是通过抑制癌细胞生长和诱导凋亡的方式发挥他们的细胞毒性作用的,因此,凋亡被认为是对各种癌症进行靶向治疗的主要机制之一。已经报道许多中草药都是通过诱导凋亡抑制肿瘤细胞增殖的,所以凋亡途径又被认为是传统药物开发和癌症基因治疗的关键靶点。香茶菜属植物在我国种类繁多,分布广泛,约有30种原植物在民间作药用,具有清热解毒、活血化淤、抗菌消炎、抗肿瘤、治疗各种肝炎等功效。研究表明,二萜类化合物是香茶菜属植物中最具典型特征的化学成分,该类化合物含量丰富,是药用香茶菜属植物中主要的活性成分。其中C-20未氧化型对映-贝壳杉烷类化合物是生物活性最强的一类,Wangzaozin A就是其中最具结构代表性的一种。迄今为止,有关Wangzaozin A的药理学研究未见报道。本论文以对映-贝壳杉烯二萜Wangzaozin A为受试药物,初步研究了该化合物对人胃腺癌细胞SGC-7901生长的影响以及细胞凋亡诱导效应。所用到的研究方法主要有细胞毒性测试、细胞增殖抑制、彗星电泳、流式细胞术、染色质结构形态观察、DNA电泳等。研究结果表明:①Wangzaozin A具有很强的细胞毒性,在≤8μM的低浓度作用下对SGC-7901细胞具有显著的生长抑制效应,而≥12μM的高浓度作用能致癌细胞死亡。生长抑制效应和致死效应都具有显著的时间、剂量依赖性。②在Wangzaozin A的作用可导致SGC-7901细胞DNA损伤,损伤率具有明显的时间、剂量效应。在去除药物作用以后,细胞DNA损伤率下降,说明在一定程度药物引起的损伤可被细胞自身修复。药物≤8μM时引起的细胞DNA损伤可能是SGC-7901细胞生长抑制的重要因素之一。③Wangzaozin A可显著地影响SGC-7901细胞周期分布,使细胞发生G2/M期周期阻滞。G2/M期阻滞是细胞DNA损伤激活检验点的结果,也可能是药物影响细胞骨架及分裂装置构建造成的。周期阻滞是药物导致SGC-7901细胞死亡的作用途径之一。④Wangzaozin A能显著地降解SGC-7901细胞DNA,且具有显著的时间、剂量效应。药物作用剂量低于一定阀值主要是以诱导凋亡的方式致死癌细胞,作用剂量超过一定阀值则可使癌细胞大量坏死。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一部分 综述
• 第一节 细胞凋亡研究概况
• 1. 细胞凋亡的特征
• 1.1 形态学特征
• 1.2 生物化学特征
• 2. 细胞凋亡与坏死的区别
• 3. 细胞凋亡的信号传导途径
• 3.1 细胞凋亡的死亡受体途径
• 3.2 细胞内应激凋亡途径
• 4. Caspase 家族与细胞凋亡（Caspase family and apoptosis）
• 5. 线粒体与细胞凋亡
• 6. 细胞凋亡的调控基因
• 6.1 凋亡促进（pro-apoptosis）基因
• 6.2 凋亡抑制（anti-apoptosis）基因
• 7.Bcl-2家族与细胞凋亡（Bcl-2genefamilyandcellapoptosis）
• 8. P53 基因与细胞凋亡（P53 gene and cell apoptosis）
• 9. 活性氧（reactive oxygen species，ROS）与细胞凋亡
• 10. 细胞凋亡的生物学意义
• 11. 细胞凋亡常用的检测方法
• 11.1 凋亡细胞的形态学观察
• 11.2 分子生物学及免疫学技术
• 11.3 流式细胞术检测细胞凋亡
• 第二节 癌症及天然抗癌药物概况
• 1. 癌症
• 2. 天然抗癌药物概况
• 2.1 紫杉醇
• 2.2 喜树碱
• 2.3 长春碱类
• 2.4 黄酮类
• 2.5 丹参酮
• 2.6 苦参碱
• 2.7 灵芝多糖
• 第三节 中药与抗肿瘤研究
• 1. 中药与肿瘤治疗
• 2. 中药的抗肿瘤机制
• 3. 中药与肿瘤细胞诱导凋亡
• 4. 中药诱导肿瘤细胞凋亡的机制
• 第四节 对映-贝壳杉烷类化合物及其来源
• 1. 香茶菜属植物及其二萜化学成分概况
• 2. 香茶菜属植物生药学研究概况
• 2.1 抗肿瘤作用
• 2.2 抗菌作用
• 2.3 抗炎作用
• 2.4 保肝作用
• 2.5 抗氧化作用
• 2.6 对心血管的作用
• 2.7 增强免疫力
• 3. 本研究的目的及意义
• 参考文献
• 第二部分 对映-贝壳杉烯二萜WangzaozinA对人胃腺癌细 胞SGC-7901生长的影响及诱导凋亡的初探
• 1 实验材料
• 2 实验试剂
• 3 实验仪器与药品
• 4 实验方法
• 4.1 细胞培养
• 4.2 SRB 法测试Wangzaozin A 的细胞毒作用
• 4.3 集落形成法测定Wangzaozin A 对SGC-7901 细胞集落形成的影响
• 4.4 台盼蓝排染法检测Wangzaozin A 作用后细胞存活数
• 4.5 吉姆萨染色（Giemsa stain）观察Wangzaozin A 引起的细胞形态变化
• 4.6 荧光染料 Hoechst33258 染色观察 Wangzaozin A 引起的细胞染色质形态变化
• 4.7 单细胞凝胶电泳法（SCGE）检测Wangzaozin A 对细胞的DNA 损伤
• 4.8 流式细胞术检测Wangzaozin A 对细胞周期的影响
• 4.9 DNA 琼脂糖凝胶电泳检测Wangzaozin A 诱导细胞凋亡
• 4.10 吖啶橙/溴化乙锭（AO/EB）双染检测Wangzaozin A 引起的细胞死亡率
• 5 实验结果
• 5.1 Wangzaozin A 对人胃腺癌细胞 SGC-7901 的细胞毒性
• 5.2 WangzaozinA 对SGC-7901 细胞的生长的影响
• 5.2.1 WangzaozinA 对SGC-7901 细胞克隆形成的影响
• 5.2.2 WangzaozinA 对SGC-7901 细胞存活的影响
• 5.3 WangzaozinA 对SGC-7901 细胞周期的影响
• 5.4 WangzaozinA 对 SGC-7901 细胞DNA 损伤的影响
• 5.5 WangzaozinA 诱导SGC-7901 细胞凋亡
• 5.5.1 Giemsa 染色观察细胞凋亡形态
• 5.5.2 Hoechst 33258 荧光染色对细胞染色质形态的观察
• 5.5.3 DNA 电泳检测Wangzaozin A 对细胞染色质的影响
• 5.5.4 AO/EB 双染法检测WangzaozinA 对细胞的致死率
• 6. 分析与讨论
• 7. 论文结论
• 参考文献
• 致谢
• 附录