免疫突触后CD4+T细胞中SNK/SPAR表达的研究

论文摘要

背景和目的:免疫突触是位于T细胞和抗原提呈细胞（APC）接触面之间的一种特化的信号转导区,该区域能产生稳定的接触并发生T细胞与辅助分子间的信号转导。有研究表明,T细胞活化伴随着免疫突触间隙的泛素化过程,免疫突触不仅是活化过程所触发的位点,它还通过信号转导物质的泛素化控制整个活化过程,T细胞识别抗原的一个重要特征是TCR/肽-MHC的相互作用是一个自限性过程,但目前对TCR受体介导的有细胞定位效应的泛素化机制的中间环节尚不清楚。现已明确,在神经终末处,蛋白质泛素化在协助蛋白质改变突触功能方面起一定的作用。神经元活化依赖性的血清诱导激酶（ serum inducible kinase,SNK） -树突棘相关的Rap特异性GTP酶活化蛋白（spine-associated Rap guanosine triphosphatase （GTPase） activating protein,SPAR）-泛素蛋白酶体途径对突触兴奋性提高后的突触功能缓冲起稳态调节作用,该途径能维持局部突触界面修饰为基础的突触可塑化的稳定性,能全面调整神经元活化水平,对该途径的调控将成为控制突触重构的强有力的方法。鉴于神经突触和免疫突触共享许多相似的特性,神经系统和免疫系统通过突触在构成它们的两个细胞之间直接传递和转换强大的高位分泌控制信号,结构上神经突触和免疫突触都由中央活化区和富含粘附分子的周边区组成,推测SNK- SPAR途径极有可能通过控制免疫突触的强度参与免疫突触后T细胞活化后的自限性调节（亦或自稳性调节）。故本论文对此推测进行了前期的基础性论证,在RNA和蛋白质水平上观察了SNK/SPAR在免疫突触后CD4+T细胞中的表达及其在细胞内的动态分布过程,以期有助于揭示SNK-SPAR途径在免疫突触中的作用,并为寻找使T细胞应答恢复稳态的特异性干预的潜在靶点提供必要的前期工作。方法:用尼龙毛柱结合间接Panning法制备纯化的大鼠脾CD4+T淋巴细胞（免疫突触后细胞）,以最适剂量5μg/ml的刀豆蛋白A（Con A）活化CD4+T细胞,根据孵育时间设定7个观察时间点（10min、30min、1h、2h、6h、24h、48h）,各时间点同时均设对照组。通过逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和免疫荧光细胞化学法分别检测CD4+T细胞中SNK/SPRA的mRNA和蛋白水平表达的动态变化结果:1.实验组SNK mRNA在7个时间点上均有表达,其表达高峰在30 min,与10min、2h、6h、24h、48h相比有显著差异（P<0.05）,且48h时表达最少,但条带清晰可见。对照组SNK mRNA在10min24h的6个时间点上有表达且表达高峰亦为30min,与2h、6h、24h相比有显著差异（P<0.05）,随后迅速回落,48h时未检测到其表达。实验组SPAR mRNA在7个时间点上均有表达,48h时下降到最低点,与6h、24h相比有显著差异（P<0.05）。对照组变化趋势与实验组相似,且表达在48h时降到最低点,该点与10min、30min、1h、2h、6h相比有显著差异（P<0.05）。实验组SNK mRNA表达较对照组在表达高峰时间点上未见显著差异,仅在时间点延伸时即在48h时间点上具有统计学意义（P<0.05）。SPAR mRNA的表达在实验组和对照组中24h和48h时有明显差别（P<0.05）,其他各组相比无统计学意义。CD4+T细胞内SNK、SPRA蛋白质的表达无明显相关性。2.实验组和对照组SNK蛋白质的表达在1h时达到表达高峰然后迅速下降,与10min、30min、2h、6h、24h、48h相比有显著差异（P<0.05）。实验组SPAR蛋白质的表达在在48h时下降到最低点,但是与其它时间点相比无显著差异（P>0.05）。对照组SPAR蛋白质的表达在48h时也下降到最低点,与10min、30min、1h、2h相比有显著差异（P<0.05）。SNK蛋白质表达在实验组和对照组中2h,24h和48h时有明显差别（P<0.05）。SPAR蛋白质表达在实验组和对照组中48h时有明显差别（P<0.05）。CD4+T细胞内SNK、SPRA蛋白质的表达无明显相关性。结论:1.CD4+T细胞确有SNK/SPRA mRNA和蛋白质的功能性表达;2.Con A活化的纯CD4+T细胞培养体系中缺乏SNK-SPRA途径的调控。

论文目录

• 一、正文
• （一） 中文摘要
• （二） 英文摘要
• （三） 前言
• （四） 材料与方法
• （五） 结果
• （六） 讨论
• （七） 结论
• （八） 参考文献
• 二、文献综述
• （一） 综述
• （二） 参考文献
• 三、致谢