吉非替尼与紫杉醇合用于HERs高表达胃癌细胞的实验研究

论文摘要

联合应用靶向HER1（ErbB1,EGFR）的抗肿瘤药吉非替尼与传统化疗药紫杉醇,观察HERs高表达胃癌细胞的生长抑制作用及对HERs的影响。吉非替尼（Gefitinib,Iressa）是苯胺喹唑啉类HER1酪氨酸激酶抑制剂（TKIs）;紫杉醇（Paclitaxel,Taxol）是抗微管药,二者通过不同作用机制引发肿瘤细胞凋亡。胃癌在我国是高发生率、高死亡率的肿瘤,目前针对胃癌的靶向治疗或联合靶向药物与传统化疗药物的研究较少,而胃癌中33%～74%存在HER1的高表达。联合应用HER1靶向药物吉非替尼与化疗药紫杉醇,考察其合用时的疗效,相互作用（协同,相加等）,及可能的作用机制是本研究的主要目的。研究中先采用MTT法考察单独给予两药对不同HERs表达水平胃癌细胞的抑制作用。再采用MTT法检测两药不同比例联合应用对HERs高表达胃癌细胞的抑制作用,在此基础上通过计算CI值（Combination Index Value）,考察两药合用于HERs高表达胃癌细胞株的相互作用关系（协同或相加）。研究发现在两药浓度比例为330:1,联合抑制率在60～80%时,能够协同抑制HERs高表达胃癌细胞。并进一步探讨其可能的机制,通过WesternBlot法检测药物作用对HERs、磷酸化HERs以及下游信号通路中（如PI3K-Akt信号途径）信号分子（Akt/磷酸化Akt）表达的影响;通过免疫荧光法检测药物对微管聚合的影响。最终导致细胞凋亡增多,通过Hochest33342染色及检测凋亡相关蛋白的表达,进一步确证协同促进细胞凋亡的作用。结果表明两药适宜配比可协同抑制HERs高表达胃癌细胞的生长。

论文目录

• 英文缩略词
• 摘要
• Abstract
• 前言
• 实验材料
• 一、药品和试剂
• 二、溶液配制
• 三、细胞株
• 四、主要仪器
• 实验方法
• 一、细胞培养
• 二、MTT法测定肿瘤细胞存活率
• 三、克隆形成试验测定药物对肿瘤细胞克隆原形成的影响
• 四、细胞生长曲线绘制
• 五、Western Blot杂交分析蛋白表达
• 六、免疫荧光法
• 七、间接免疫荧光法测定药物对细胞骨架的影响
• 八、Hoechst 33342染色荧光显微镜观察凋亡
• 九、联合指数（combination index，CI）的计算
• 实验结果
• 1、吉非替尼与紫杉醇在体外抑制胃癌细胞增殖作用
• 50'>1.1 MTT法测定吉非替尼和紫杉醇单独作用的IC₅₀
• 1.2 吉非替尼与紫杉醇联合应用及各自单用量效曲线的改变
• 1.3 CI值评价吉非替尼与紫杉醇合用的相互作用
• 1.4 合用和单用对时间依赖性生长曲线的影响
• 1.5 合用和单用对胃癌细胞克隆形成的影响
• 2、HERs在胃癌细胞中的表达及吉非替尼与紫杉醇单用或合用对HERs、p-HERs表达及下游信号分子表达的影响
• 2.1 免疫荧光法检测胃癌细胞中的HERs表达
• 2.2 Western Blot法检测胃癌细胞中的HERs表达
• 2.3 吉非替尼与紫杉醇单用或合用对HERs、p-HERs表达及下游信号分子表达的影响
• 3、吉非替尼与紫杉醇单用与合用对微管聚合的影响
• 4、单用和合用对凋亡及相关蛋白表达的影响
• 4.1 Hochest33342染色观察对凋亡的影响
• 4.2 吉非替尼与紫杉醇单用和合用对凋亡相关蛋白表达的影响
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述: 针对表皮生长因子受体家族的肿瘤靶向治疗
• 致谢
• 个人简历