论文摘要
目的:β3-半乳糖基转移酶家族是糖基转移酶的一个家族,其β3-GalT活性在动物中广泛存在。本文旨在克隆得到该家族的新成员,并从核酸、蛋白等各个水平对该新基因的结构及相关功能进行初步的研究。方法:1.利用电子克隆方法获得人β3GalT7基因的cDNA序列,从人cDNA文库中（肺、结肠,Clontech Co.ltd.）扩增序列,装入pGEM-T载体并测序验证。运用各种生物软件和网络服务器、数据库对克隆到的新基因及其编码的蛋白进行全面分析,并用荧光共聚焦显微镜对该酶进行亚细胞定位分析。2.采用半定量RT-PCR方法和Norhtern Blot方法检测β3GalT7在不同组织细胞中mRNA表达水平。3.将pGEM-T载体中的目的基因亚克隆至原核表达载体pGEX-6p-1,转化BL21大肠杆菌,IPTG诱导表达融合蛋白;免疫家兔获取多克隆抗体;并以Western Blot和免疫组化方法检测β3GalT7编码蛋白在多种细胞、组织中的表达差异。结果:从人肺cDNA文库中克隆到人类β3-半乳糖基转移酶家族中的一个新成员β3GalT7（AY277592,EC2.4.1.-）。该基因定位在人类染色体19q13.2,它包含一个1191bp的开放阅读框（ORF）。编码的蛋白质包括一个信号肽和一个半乳糖基转移酶结构域,分子量和等电点分别为43.3kDa和8.66。亚细胞定位于核膜周围的胞浆中。从原核表达中获得的融合蛋白的分子量和预测相符。Northern Blot显示β3GAlT7在肺,喉和回肠组织中高表达,而在舌,乳房,子宫,睾丸等组织中表达较低。此外半定量RT-PCR显示β3GalT7在人类不同的肿瘤细胞中转录水平有明显差异。Western Blot检测到了该酶在多种肿瘤细胞内有较高的表达。免疫组化分析显示肿瘤细胞和组织中该酶有较高的表达,与正常组织比较具有一定的差异性。结论:成功克隆到了β3-半乳糖基转移酶家族的一个新成员β3GAlT7。成功表达了该基因的全长编码序列并制备了多克隆抗体,可用于今后对该基因的功能研究。从核酸和蛋白质水平的多种检测表明该酶在组织细胞中表达水平存在较大的差异即具有组织特
论文目录
相关论文文献
- [1].甲型流感病毒编码蛋白的突变及其致病机制[J]. 病毒学报 2013(04)
- [2].人博卡病毒编码蛋白功能研究[J]. 病毒学报 2020(01)
- [3].干扰素刺激基因viperin所编码蛋白的结构与抗病毒功能的研究进展[J]. 中国预防兽医学报 2017(05)
- [4].人巨细胞病毒UL55编码蛋白结合蛋白的筛选与鉴定[J]. 微生物学杂志 2016(05)
- [5].丙型肝炎病毒编码蛋白的生物学功能[J]. 世界华人消化杂志 2009(28)
- [6].HA117编码蛋白、P-gp和bcl-2在儿童急性白血病中的表达及意义[J]. 中国小儿血液与肿瘤杂志 2013(05)
- [7].禽流感病毒基因组及其编码蛋白的结构与功能[J]. 广东农业科学 2012(01)
- [8].人乳头瘤病毒编码蛋白的进化分析[J]. 中国病原生物学杂志 2016(11)
- [9].SH2D7基因及其编码蛋白的生物信息学分析[J]. 科技导报 2015(02)
- [10].新基因HA117编码蛋白在儿童急性白血病中的表达及其临床意义[J]. 第三军医大学学报 2012(03)
- [11].人巨细胞病毒UL141编码蛋白相互作用蛋白的筛选和分析[J]. 中国医科大学学报 2013(10)
- [12].疱疹病毒UL47基因及其编码蛋白研究进展[J]. 中国人兽共患病学报 2009(11)
- [13].小RNA病毒3A基因及其编码蛋白研究进展[J]. 中国人兽共患病学报 2016(02)
- [14].病毒中具有抗肿瘤作用的编码蛋白[J]. 医学研究生学报 2011(10)
- [15].与人巨细胞病毒UL130编码蛋白相互作用蛋白的筛选[J]. 中国医科大学学报 2010(06)
- [16].牛消化道I型肽载体克隆测序及编码蛋白结构分析[J]. 畜牧兽医学报 2009(04)
- [17].PCV2 ORF1～ORF4基因所编码蛋白功能的研究进展[J]. 经济动物学报 2020(01)
- [18].猪NLRP3基因克隆及其在DF-1细胞的表达[J]. 中国兽医学报 2017(04)
- [19].分枝杆菌RD-1区编码蛋白致病机制的研究进展[J]. 畜牧与兽医 2018(01)
- [20].猪圆环病毒Ⅱ型SC株ORF3基因克隆及其编码蛋白的生物信息学分析[J]. 基因组学与应用生物学 2010(05)
- [21].疱疹病毒gC基因及其编码蛋白研究进展[J]. 中国动物传染病学报 2009(02)
- [22].与人巨细胞病毒UL132编码蛋白相互作用蛋白的初步筛选和鉴定[J]. 吉林大学学报(医学版) 2017(04)
- [23].HLA新等位基因A~*02:355序列及其编码蛋白分子三维结构模拟分析[J]. 中国免疫学杂志 2019(13)
- [24].生物[J]. 招生考试通讯(高考版) 2017(11)
- [25].蝙蝠：大自然中移动的病毒库[J]. 生命与灾害 2020(02)
- [26].日本斑点热立克次体安徽120株ompB基因及其编码蛋白的生物信息学和B细胞抗原表位分析[J]. 安徽医科大学学报 2020(06)
- [27].2013-2014年杭州地区季节性A(H3N2)流感病毒PB1基因及其编码蛋白的遗传进化特征研究[J]. 中国预防医学杂志 2017(03)
- [28].5个枳BOR基因的克隆与缺硼胁迫下的表达分析[J]. 华中农业大学学报 2016(05)
- [29].家犬IGF2BP2基因生物信息学分析[J]. 广东农业科学 2009(10)
- [30].基因4型HEV上海株ORF_2编码蛋白表达及其抗原性分析[J]. 畜牧与兽医 2008(05)