IVF失败者子宫内膜galectin-3表达及其容受性评估

论文摘要

目的目前IVF-ET妊娠率不断提高,但有患者胚胎评分好仍不能妊娠。这使人们对不孕症患者着床方面的缺陷越来越重视,着床时胚胎和子宫内膜的同步发育与相互配合是很重要的,其中,子宫内膜的接受性又是一个关健性因素,自然成为一个研究热点。使用抑制性消减杂交技术[1]（suppression subtractive hybridization,SSH）对差异表达基因片段进行测序,建立了与子宫内膜容受性相关的差异表达基因文库,筛选出与子宫内膜容受性相关基因,如galectin-3等。本研究通过分析galectin-3mRNA及蛋白在IVF妊娠组和IVF失败组前一排卵周期分泌期子宫内膜的表达,评价galectin-3与子宫内膜容受性的关系,进一步探索galectin-3在生殖中的作用,为提高IVF妊娠率提供依据。方法从子宫内膜容受性相关的差异表达基因文库中筛选出的与子宫内膜容受性相关基因中选择galectin-3进行研究。研究组为2010年1月-2010年4月在河北医科大学第四医院生殖医学科行IVF失败患者11例,不育原因为输卵管因素9例,子宫内膜异位症2例。对照组为10例同期行IVF妊娠者,患者年龄24～39岁,不孕年限2～10年。所有入选病例均符合以下条件:排卵前子宫内膜厚度等于或超过8 mm;形态三线或接近三线。采集病人前一月经周期排卵后6天或7天的子宫内膜,并置于液氮中保存,部分组织用4%甲醛固定。应用RT-PCR检测技术,分别取研究组及对照组子宫内膜各约50 mg加入Rezol 1 ml置匀浆器内充分匀浆,提取总RNA,取出0.5μl,进行反转录得cDNA,继而进行PCR扩增,同时以扩增片段长度为540 bp的β-actin作为内参照。PCR循环条件为:94℃5 min,1个循环;94℃40 s,50℃40 s,72℃50 s,30个循环;72℃10 min,1个循环。产物经1.5%琼脂糖凝胶电泳后,用VDS图像分析系统进行照相和图像分析。IOD值经内参照校正,将校正值进行统计学分析。应用免疫组化检测:将子宫内膜用4%甲醛固定后石蜡包埋,制备4μm厚连续组织切片。分别进行HE和ABC免疫组化染色。脱蜡、消化、高压抗原修复、封闭、加入一抗（单克隆小鼠抗人galectin-3稀释浓度为1:100）、二抗、DAB显色、苏木素复染、脱水后透明、中性树胶封片。用PBS代替一抗做阴性对照。显微镜观察并拍照。阳性判断标准:每张染色片随机选取5个视野,以背景清晰、细胞质着色呈棕黄色为阳性,分为4个等级:细胞均无任何阳性染色为“-”;25%以下细胞阳性染色为弱阳性（+）;25%50%细胞阳性染色为中等强度阳性（++）;50%以上细胞阳性染色强阳性（+++）。控制性超促排卵:排卵后6-7天（黄体中期）给予醋酸曲普瑞林（德国辉凌制药）每天0.1mg ,达到降调节标准后给予促性腺激素（Gonal-F,瑞士serone公司;hMG,丽珠制药）,采用经阴道超声监测子宫内膜变化和卵泡生长情况,当至少有3个卵泡直径大于20mm时,当晚注射艾泽（瑞士serone公司） 250 IU,艾泽注射后38 h左右取卵,体外受精,于取卵后3 d胚胎移植,移植后21d经阴道B超见到孕囊为临床妊娠。所有数据采用SPSS11.5统计软件进行统计分析。计量资料采用x±s表示,组间差异采用t检验,p<0.05即有显著性差异;计数资料采用秩和检验,p<0.05即有显著性差异。结果比较IVF失败组及IVF妊娠组年龄,不育年限、Gn天数、获卵数、优胚数、ET胚胎数,均无统计学差异。IVF失败者子宫内膜着床窗口期galectin-3mRNA的表达明显低于妊娠组,galectin-3在研究组的表达为0.11±0.08（ n=11）,对照组的表达升高为0.42±0.17（ n=10）,P<0.01,有统计学意义（p<0.05）。Galectin-3在IVF失败组及IVF妊娠组均有表达,IVF失败组（n=11）,“-”表达1例,“+“表达7例,“++”表达3例,“+++”表达0例。IVF妊娠组（n=10）,“-”表达1例,“+”表达1例,“++”表达3例,“+++”表达5例（p=0.013）。结论galectin-3是子宫内膜容受性相关基因之一, IVF失败患者着床窗口期galectin-3的低表达可能是造成IVF失败者子宫内膜容受性低的原因之一,胚胎着床障碍是主要原因之一。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 研究论文 IVF 失败者子宫内膜galectin-3 表达及其容受性评估
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 附图
• 附表
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述 Galecctin-3 在人子宫内膜的表达及其对人类生殖的影响
• 参考文献
• 致谢
• 个人简历