泰国香米质量安全分子指纹检测技术研究

论文摘要

本研究采用RAPD、多重荧光PCR-毛细管-SSCP、2DE、MALDI-TOF等现代分子生物学技术,开展泰国茉莉香米品种鉴定和纯度检测、香米新陈度检测、食源性致病菌高通量快速鉴定方法研究,并进行方法标准化研究,目的是加强我国进出口食品安全保障技术储备,为口岸大米的查验提供先进的科学手段,提高我国大米质量和安全的监管水平,保护消费者利益,促进大米进出口贸易的正常运行。研究共分三个部分,第一部分是泰国茉莉香米的品种鉴定和纯度检测。采用RAPD指纹技术,通过对120条随机引物的筛选,收集泰国茉莉香米法定品种KDML105和RD15以及具有代表性的非茉莉香米共计32个水稻品种的指纹图谱数据,根据指纹数据进行品种聚类关系分析,表明RAPD指纹分类与传统分类基本一致。为了提高方法的可操作性,将RAPD方法部分转化为SCAR,建立了R2-449 RAPD和R5-1107SCAR构成的泰国茉莉香米品种鉴定和纯度检测方法。上述两个分子标记双隐性者为泰国茉莉香米。通过多次实验证实了该方法对泰国茉莉香米法定品种KDML105和RD15的分辨能力、稳定性和定量准确性。第二部分为泰国香米新陈度鉴定方法研究。针对目前大米新陈度脂肪酸检测标准方法所存在的一些限制,采用2DGE技术,对6个不同年份的泰国香米样品进行蛋白质组分析,并对主要蛋白点进行肽指纹图谱分析,结合水稻蛋白质组数据库,对蛋白质进行鉴定。结果显示蛋白质指纹图谱呈现与香米年份一致的变化规律,碱性蛋白先降解,谷蛋白是变化最快的蛋白。2008年和2007年份样品差异明显,说明该方法具有较高的分辨率,另外由于蛋白质指纹信息量大,有利于对大米储藏的生物学过程进行分析,了解大米品质的变化规律,为粮食的生产、储存和流通过程中各个环节的质量控制提供科学指导。第三部分为大米产品中食源性致病菌快速鉴定方法研究。针对传统的微生物鉴定方法耗时费力,以及常规PCR检测方法需要对特定微生物设计特定引物的情况,利用多重荧光PCR-CE-SSCP技术高通量、快速、自动化的特点,建立16srRNA和gyrB基因的多重荧光PCR体系,通过毛细管电泳对扩增片段的构象多态性进行分析,收集了25个标准菌株的指纹数据,采用RAPD分析方法对菌种进行聚类分析,结果显示SSCP聚类关系和传统分类基本一致。方法利用分子内标相对位置来检测信号峰,多次实验证实了SSCP信号峰具有很好的重现性。另外,由于近年来新出现阪崎杆菌日益受到关注,例如国际上多次报道了从婴幼儿米粉中检出该菌。因此研究针对42株从食品基质分离的阪崎杆菌进行了SSCP分析,为阪崎杆菌检测方法的进一步优化以及该菌的菌群特征提供了参考数据。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 绪论
• 1.1 泰国香米的质量与安全问题
• 1.1.1 泰国香米状况
• 1.1.2 香稻遗传学研究
• 1.1.3 大米新陈度问题
• 1.1.4 大米及制品的致病菌污染
• 1.2 分子指纹技术
• 1.2.1 RAPD
• 1.2.2 SSCP
• 1.2.3 蛋白质指纹（蛋白质组）
• 第二章 泰国香米品系鉴定及纯度检测方法研究
• 2.1 材料与设备
• 2.2 实验方法
• 2.3 结果和讨论
• 第三章 泰国香米新陈度的蛋白质指纹分析技术研究
• 3.1 实验材料和设备
• 3.2 实验方法
• 3.3 结果和讨论
• 第四章 米粉中致病微生物的 PCR-CE-SSCP 快速鉴定方法研究
• 4.1 实验材料和设备
• 4.2 实验方法
• 4.3 结果与讨论
• 第五章 总结
• 参考文献
• 致谢
• 作者简历