连成白鸭产蛋性能三个候选基因的相关研究

论文摘要

连城白鸭是我国乃至世界上少有的白色品种,是中国麻鸭中的变种,属于蛋用和药用型。深入研究连城白鸭的繁殖性能分子机理,对于培育新品种、提高种鸭繁殖性能具有重要意义。本研究克隆鸭NPY和VIPR基因的完整编码区（CDS）,进行核酸和蛋白序列分析,研究NPY、VIPR和PRL基因在下丘脑一垂体一卵巢性腺轴mRNA表达水平；对NPY、VIPR和PRL基因进行SNP检测,并对不同基因型个体与产蛋数进行关联分析。全文结论如下：NPY和VIPR基因的克隆与序列分析：通过PCR扩增和克隆测序获得了NPY和VIPR基因cDNA序列,它们包含了完整的编码区,CDS长度分别为294bp和1338bp。NPY基因编码98个氨基酸残基的NPY蛋白前体,被划分为不稳定蛋白质,推测该蛋白是一个偏酸性蛋白质,具有较强的亲水性。VIPR基因编码含有446个氨基酸残基的蛋白前体,被划分为不稳定蛋白质,推测该蛋白是一个偏碱性蛋白质,具有较强的疏水性。Real-time PCR分析NPY、VIPR和PRL基因在下丘脑—垂体—卵巢性腺轴mRNA表达水平：在60d时下丘脑NPY基因表达量极显著高于垂体和卵巢（P<0.01）,垂体NPY基因表达量显著高于垂卵巢（P<0.05）,在300d时下丘脑NPY基因表达量极显著高于垂体（P<0.01）,垂体NPY基因表达量极显著高于卵巢（P<0.01）；在500d时垂体和下丘脑NPY基因表达量极显著高于卵巢（P<0.01）。在60d和300d时垂体VIPR基因表达量极显著高于下丘脑（P<0.01）,下丘脑VIPR基因表达量极显著高于卵巢（P<0.01）；在500d时垂体VIPR基因表达量极显著高于下丘脑和卵巢（P<0.01）,下丘脑和卵巢之间表达差异不显著。在60d时垂体PRL基因表达量极显著高于卵巢（P<0.01）,卵巢PRL基因表达量极显著高于垂体（P<0.01）；在300d时垂体PRL基因表达量极显著高于下丘脑（P<0.01）,下丘脑PRL基因表达量显著高于卵巢（P<0.05）；在500d时垂体PRL基因表达量极显著高于下丘脑（P<0.01）,下丘脑PRL基因表达量极显著高于卵巢（P<0.01）。NPY、VIPR和PRL基因多态性与产蛋数进行关联分析：NPY基因部分外显子1和外显子2不存在突变位点。VIPR基因第3外显子的变异与连城白鸭500d产蛋量存在显著关联（P<0.05）；VIPR基因第12外显子的变异与连城白鸭200d产蛋量存在极显著关联（P<0.01）,与连城白鸭400d产蛋量存在显著关联（P<0.05）,这两个突变位点都没有引起氨基酸突变,属于无义突变.PRL基因5’非翻译区的变异与连城白鸭400、500d产蛋量存在显著关联（P<0.05）；PRL基因内含子1的变异与连城白鸭300d产蛋量存在显著关联（P<0.05）,与连城白鸭400、500d产蛋量存在极显著关联（P<0.01）；PRL基因第3外显子的变异与连城白鸭400、500d产蛋量存在显著关联（P<0.05）,形成错义突变,导致第90位氨基酸由苏氨酸（Thr）转变为丙氨酸（Ala）。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 引言
• 第一篇 文献综述
• 第一章 NPY、VIPR和PRL的研究进展
• 1 神经肽（NPY）的研究进展
• 1.1 NPY的结构
• 1.2 NPY的分布
• 1.3 NPY的分子生物学特性
• 1.4 鸡NPY基因多态性与繁殖性状相关性
• 2 VIP和VIPR研究进展
• 2.1 VIP的结构
• 2.2 VIPR的功能
• 2.3 VIP和VIPR的分布
• 2.4 VIP和VIPR的作用
• 2.5 VIP的信号传导调控途径
• 2.6 VIPR基因与家禽生产性状的关系的研究进展
• 3 催乳素（PRL）的研究进展
• 3.1 PRL的结构
• 3.2 PRL的生物学功能
• 3.3 PRL基因的多态性
• 3.4 PRL的调节及作用方式
• 参考文献
• 第二篇 实验研究
• 第二章 鸭NPY和VIPR基因编码区的克隆测序
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.2 方法
• 2 结果与分析
• 2.1 鸭NPY基因CDS区的核酸序列分析
• 2.2 鸭VIPR基因CDS区的核酸序列分析
• 3 讨论
• 4 小结
• 参考文献
• 第三章 蛋白质序列的生物信息学分析
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.2 方法
• 2 结果与分析
• 2.1 NPY蛋白质组成、基本理化性质、疏水性和信号肽分析
• 2.2 VIPR蛋白质组成、基本理化性质、疏水性和信号肽分析
• 2.3 鸭NPY蛋白质功能位点、二级结构以及三级结构预测
• 2.4 鸭VIPR蛋白质功能位点、二级结构以及三级结构预测
• 2.5 NPY同源性比较与系统发育树分析
• 2.6 VIPR同源性比较与系统发育树分析
• 3 讨论
• 4 小结
• 参考文献
• 第四章 鸭NPY、VIPR和PRL基因mRNA在下丘脑—垂体—卵巢性腺轴的表达分析
• 1. 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.2 试验方法
• 2 结果与分析
• 2.1 GADPH、NPY、VIPR和PRL基因的PCR反应
• 2.2 样品mRNA的Real-time PCR结果
• 2.3 不同组织在60天、300天和500天的定量表达
• 3 讨论
• 4 小结
• 参考文献
• 第五章 NPY、VIPR、和PRL基因多态性与连城白鸭产蛋性能的相关性分析
• 1. 材料与方法
• 1.1 实验动物
• 1.2 主要试剂和仪器
• 1.3 常规溶液及试剂配制
• 1.4 血液DNA提取
• 1.5 引物设计与合成
• 1.6 PCR反应及扩增产物处理
• 1.7 PCR产物聚丙烯酰胺凝胶电泳
• 1.8 基因多态性指标统计分析方法
• 2 结果与分析
• 2.1 连城白鸭基因组DNA提取结果
• 2.2 PCR产物扩增
• 2.3 PCR-SSCP法检测NPY基因部分外显子1和外显子2的突变位点
• 3 讨论
• 小结
• 参考文献
• 致谢
• 硕士在读期间发表的学术论文