癫痫大鼠脑中H2S/CBS体系的变化及作用

论文摘要

目的：观察氯化锂-匹罗卡品点燃癫痫（epilepsy,EP）形成过程中大鼠行为、学习记忆能力以及硫化氢（H2S）与光硫醚-p-合酶（CBS）水平变化,探讨H2S/CBS体系在癫痫形成中的作用及机制。方法：雄性SD大鼠随机分为正常对照组（NC组）、癫痫模型组（EP组）、癫痫+羟胺（hydroxylamine, HA）组（HA组）、癫痫+硫氢化钠（sodium hydrosulfide, NaHS）组（NaHS组）,每组大鼠又分为2h、24h、7d和30d四个时间点。利用氯化锂-匹罗卡品腹腔注射复制大鼠癫痫模型,出现Ⅳ级及以上无明显间隔的癫痫持续状态（status epilepticus,SE）为模型复制成功。行为学监测大鼠癫痫Ⅳ级及以上发作的潜伏期以及成型后30天内自发性癫痫发作情况；Morris水迷宫检测大鼠的空间学习记忆能力；敏感硫电极法测定大鼠血浆中H2S含量；免疫印迹（WB）检测大鼠海马中CBS蛋白的表达情况；逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测海马中的CBS、c-fos和CREB mRNA表达变化。结果：①氯化锂-匹罗卡品点燃大鼠癫痫急性发作的模型成功率为91.7%,慢性期可以出现自发癫痫发作,是探讨颞叶癫痫发生机制的理想模型。②EP组大鼠癫痫发作急性期（2h和24h）血浆H2S水平、海马CBS mRNA和蛋白表达水平明显高于对照组（P<0.05）；随后在7d、30d时H2S/CBS水平降低,显著低于对照组（P<0.05）。③外源性H2S供体NaHS可提高癫痫大鼠H2S/CBS水平,在各时间点均明显高于EP组和HA组（P<0.05）。④NaHS组大鼠出现SEⅣ级及以上的发作潜伏期长于EP组和HA组,但无显著性差异（P>0.05）；慢性期NaHS组大鼠自发性癫痫发作次数明显少于EP组和HA组（P<0.05）,EP组和HA组比较无显著性差异（P>0.05）。⑤水迷宫测试癫痫大鼠的空间辨别学习记忆能力与NC组比较明显减退,定位航行实验中逃避潜伏期和搜索距离明显延长（P<0.05）,第三象限游泳时间、第三象限游泳距离占总距离的百分比以及穿越平台次数明显减少（P<0.05）；NaHS可提高癫痫大鼠的学习记忆能力,与EP组、HA组比较,空间学习记忆能力各项检测指标均有显著差异（P<0.05）。⑥EP组、HA组和NaHS组大鼠海马组织c-fos mRNA表达在2h、24h、7d的时间点均高于NC组（P<0.05）,而在30d的时间点低于NC组（P<0.05）；NaHS组在2h时间点低于EP组和HA组（P<0.05）。⑦大鼠癫痫发作急性期（2h和24h）海马组织CREBmRNA表达上调,明显高于NC组（P<0.05）,而30d时EP组、HA组海马CREB mRNA表达均下调,明显低于NC组比较（P<0.05）；而NaHS组在24h、7d、30d时间点CREBmRNA表达均显著高于EP组和HA组（P<0.05）,7d、30d时与NC组相比均无统计学差异（P>0.05）。结论：大鼠癫痫发作急性期H2S和CBS表达水平升高,慢性自发性痫性发作期间H2S和CBS表达水平下降,提示H2S/CBS参与癫痫的发病过程；癫痫发作可导致大鼠学习记忆能力减退,外源性H2S供体NaHS可提高H2S与CBS表达水平、减轻大鼠癫痫发作和改善癫痫大鼠的学习记忆能力；癫痫大鼠海马c-fos和CREB mRNA急性期内表达上调,而(CREB mRNA在慢性发作期表达下调,提高H2S/CBS水平可上调慢性癫痫发作期大鼠海马CREB mRNA的表达。

论文目录

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• 材料与方法
• 实验方法
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• 结论
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• 综述
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