电针对心肌梗死并抑郁模型鼠行为学及海马神经可塑性的分子机制研究

论文摘要

目的观察电针对心肌梗死并抑郁模型大鼠行为学和海马神经元可塑性的影响,探讨心梗并抑郁动物模型建立方法、心梗并抑郁可能的发病机制,及电针作用机理。方法1.将成年雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为正常对照组、假手术对照组、心肌梗死并抑郁模型对照组、电针试验组和氟西汀对照组。在急性心肌梗死模型基础上,选用21天慢性轻度不可预见性应激加孤养造模。2.造模后的第1,7,14和21天,分别观察电针对各组大鼠敞箱实验、液体消耗等行为学指标的变化。3.应用TUNEL方法检测海马神经细胞元凋亡。4.采用免疫组化法观察大鼠海马神经元Bc1-2和Bax阳性细胞数和灰度值。5.RT-PCR技术检测大鼠海马BDNFmRNA,CREBmRNA和ERK1/2mRNA表达的差异。6.运用Western-blot检测大鼠海马BDNF,P-CREB和p-ERK1/2蛋白表达量的差异。结果1.心梗后并经21天慢性轻度不可预见性及孤养应激,模型组大鼠的体重增加缓慢,敞箱实验中的水平穿越格数、竖立次数、理毛时间显著减少,中央格停留时间、粪便粒数增加;总液体消耗、糖水消耗明显下降,而纯水消耗显著增多,与正常组比较,均差异有显著性（P<0.05）,提示慢性应激能够影响心梗后大鼠的体重和行为学指标;经过3周的治疗后,电针组和氟西汀组各项指标测值与模型组比较均有明显改善,差异有显著性（P<0.05）。2.TUNEL检测结果显示海马CA3区、齿状回均观察到细胞核被染成棕黄色的凋亡细胞,CA1区未见阳性细胞表达。与正常组比较,模型组大鼠海马凋亡细胞数增加,差异有显著性（P<0.05）;与模型组比较,电针组和氟西汀组凋亡细胞明显减少,但电针组与氟西汀组差异无显著性（P>0.05）。3.免疫组化结果显示海马CA3区、齿状回均观察到细胞质被染成棕黄色的阳性细胞,CA1区未见阳性细胞表达。与正常组比较,模型组大鼠海马CA3区和齿状回Bax蛋白明显增加,Bcl-2蛋白和Bcl-2/Bax比值明显减少,差异有显著性（P<0.05）;与模型组比较,电针组和氟西汀组Bax蛋白明显减少,而Bcl-2蛋白和Bcl-2/Bax比值明显增加,差异有显著性（P<0.05）,但电针组与氟西汀组比较差异无显著性（P>0.05）。4.RT-PCR检测结果显示,与正常组比较,模型组大鼠海马BDNFmRNA,CREBmRNA和ERK1/2mRNA蛋白表达量明显减少（P<0.05）;与模型组相比,电针组和氟西汀组大鼠海马BDNFmRNA,CREBmRNA和ERK1/2mRNA表达量增加（P<0.05）但电针组与氟西汀组比较差异无显著性（P>0.05）。5.Westen-blot检测结果显示,与正常组比较,模型组大鼠海马BDNF,P-CREB和p-ERK1/2蛋白表达量明显减少（P<0.05）;与模型组相比,电针组大鼠海马BDNF,P-CREB和p-ERK1/2蛋白表达量增加（P<0.05）但电针组与氟西汀组比较差异无显著性（P>0.05）。结论1.急性心肌梗死手术后结合慢性不可预见性轻度应激,可成功制作心梗并抑郁大鼠复合模型,该模型具备心肌梗死和抑郁双重特点,符合抑郁动物模型的评定标准。模型制作重复性好、症状稳定、持续时间较长,为心身疾病的基础研究提供了一个思路和方法。2.电针治疗1周后,模型鼠体重和行为学指标无明显改善,经过3周的电针治疗,模型鼠的体重较前增加,行为学指标明显改善,说明电针3周时间才能逐步发挥有效的抗抑郁作用。3.模型鼠海马CA3区、齿状回出现了细胞凋亡,且抗凋亡蛋白Bcl-2表达减少,促凋亡蛋白Bax表达增加,二者比值降低,给予电针干预3周后,Bcl-2表达增加,Bax表达减少,二者比值增高,提示心梗并抑郁的发生与海马神经元凋亡有关,电针通过抗凋亡机制,对海马神经元细胞起保护作用。4.模型鼠海马BDNF表达下调、P-CREB水平降低,推测心梗并抑郁与海马功能异常有关,存在神经可塑性降低,神经元细胞受损的表现。3周的电针治疗可显著上调大鼠海马内P-CREB水平,提高BDNF的水平,可能是电针抗抑郁、保护海马神经元细胞的分子机制之一。5.模型鼠海马p-ERK1/2水平降低,反映出心梗并抑郁存在ERK信号通路异常,本研究中电针治疗3周后,p-ERK1/2水平显著增高,提示电针可以激活ERK信号通路,通过相关ERK信号级联中的关键分子发挥抗抑郁作用。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 第一章 心肌梗死并抑郁大鼠模型的建立及电针对行为学的影响
• 1.材料
• 2.方法
• 3.结果
• 第二章 电针对心肌梗死并抑郁模型大鼠海马神经元细胞凋亡的影响
• 1.材料
• 2.方法
• 3.结果
• 第三章 电针对心肌梗死并抑郁模型大鼠海马神经元BDNF、P—CREB和p—ERK1/2基因表达的影响
• 1.材料
• 2.方法
• 3.结果
• 讨论
• 结论
• 附图
• 参考文献
• 综述一
• 综述二
• 致谢
• 攻读学位期间主要的研究成果