论文摘要
Pseudomonas sp.CP1108为分离自棉花根圈的解磷假单胞菌，经过16S rDNA序列比对，鉴定为荧光假单胞。通过三亲本杂交的方法将标记基因luxAB接合转移进CP1108菌株，所得的标记菌株CP1108L具有发光活性和对Str、Tet和Km三种抗生素的抗性，转移频率为（4.65±0.01）×10<sup>-5。将标记菌株经连续进行20次传代，均可检测到发光现象。采用碱裂解法从CP1108L中提取质粒，证明pTR102质粒已成功地转移到CP1108菌株中，并且发现CP1108L菌株的部分生理生化特性、生长曲线和在土壤中的存活能力并没有受到luxAB基因导入的影响。研究标记菌株在土壤中的存活情况，结果发现，在042d内，标记菌株在灭菌土壤和不灭菌土壤中均能存活，总体呈现下降趋势，在灭菌土壤中的定殖水平稍高于不灭菌土壤，第42d时，标记菌株的定殖密度约为103104c fu g-1土。将标记菌株CP1108L接种到棉花根盒的微宇宙土壤中，研究其定殖情况，发现标记菌株在棉花根表的定殖密度高于根际土壤中的定殖密度，主要定殖在06cm根段，且随着深度的增加定殖密度降低；棉花生长14d时，CP1108L在棉花根圈达到了最高定殖水平，根圈的的定殖数量为2.31×105c fu g-1根土、3.18×105cfu g-1鲜根，而其中以02cm根段处标记菌株的定殖数量最大，根际和根表分别达到了9.08×104c fu g-1根土、1.44×105cfu g-1鲜根。把棉花幼苗根部浸于细菌菌液中，研究了细菌在棉花幼根根表的吸附情况。发现稳定吸附发生在细菌与棉花幼根接触的前8min，在前60min内，细菌的吸附量随吸附时间的延长而增大，并且逐渐趋于饱和，解磷菌的最大吸附量为（1.021.48）×108c ell g-1鲜根；从细菌的吸附动态曲线可以看出，其吸附规律符合Langmuir吸附等温线。经计算，E.coli DH5α、CP1108和CP1108L在棉花根表的最大吸附量q10分别为4.05×106cell g-、1.45×108cell g-1和1.19×108cell g-1。解磷细菌的最大吸附量(108c ell g-1)约是大肠杆菌的最大吸附量(106cell g-1)的100倍，说明解磷促生菌株对棉花幼根具有较高的亲和性。因此，可将解磷菌株制成微生物接种剂应用于棉花的盆栽试验研究。对棉花进行盆栽试验，结果发现接种CP1108和CP1108L菌液处理棉花植株的干重、主根长和株高显著高于对照组CKⅠ；两个菌株处理之间差异性不显著，说明luxAB基因的导入对CP1108L促生长能力并没有显著影响。CP1108菌株是从棉花根圈筛选出来的具有较强解磷能力的荧光假单胞菌，其标记菌株CP1108L接种到棉花后，性状稳定，能在棉花根部吸附、定殖和存活，从而促进棉花的生长，因此可以用CP1108L代替CP1108进行土壤微生态学研究。