论文摘要
益智为姜科山姜属植物益智Alpinia oxyphylla Miq.的干燥成熟果实,是中医临床常用的一味中药。在国家“十一五”期间,基于益智仁“生品入脾,盐炙入肾,生熟有别”的传统认识,我们对其展开了系统深入的研究,初步阐明了益智仁“生品入脾·止泻,盐炙入肾·缩尿”中药炮制理论的科学内涵。目的本课题在国家自然科学基金面上项目“益智仁‘盐炙入肾-温肾缩尿’的物质基础和作用机理研究”（30973941）的支持下,对益智仁温肾缩尿的物质基础和作用机理进行研究。前期以小鼠水负荷多尿模型为基础,已完成盐益智仁缩尿有效部位筛选和部分机理研究。本文在前期基础上,建立两种大鼠多尿模型对有效部位缩尿作用进行验证和评价,并按照中医标本兼治的用药原则,设计“温肾”为本,“缩尿”为标药理指标,探讨其作用机理。方法采用文献学、药理学和化学相结合的手段开展益智仁盐炙“温肾缩尿”作用机理研究。1采用文献学方法,整理回顾益智仁、多尿动物模型的现代研究进展,为实验研究提供理论依据。2采用药理学方法,建立两种大鼠多尿模型,对盐益智仁有效部位缩尿作用进行验证和评价,并比较盐炙前后作用差异。3以肾阳虚多尿模型为基础,从脏器指数、病理形态变化、血清BUN、Cr含量和全血CD3/CD4/CD8表达等方面探讨益智仁盐炙“温肾”作用；从“抗利尿激素-环磷酸腺苷-水通道蛋白”信号途径研究“缩尿”作用机制。4采用血清药物化学方法,对盐益智仁有效部位“入血成分”进行分离鉴别,并以其为指标,比较益智仁盐炙前后药代动力学变化,从体内过程变化探讨益智仁“生熟有别”科学内涵。结果1对水负荷多尿模型大鼠,益智仁石油醚部位在9g·kg-1剂量时能显著降低其0～1h段尿量（P<0.01）,延长大鼠的首次排尿时间（P<0.05）；盐炙后在4.5g·kg-1时就有显著缩尿作用（P<0.01）,盐炙前后在18g·kg-1剂量时均能显著降低水负荷大鼠6h排泄率（P<0.05）。对肾阳虚多尿模型大鼠,益智仁石油醚部位在9g·kg’剂量时能显著降低其24h尿量（P<0.05）,盐炙前后无显著差异。2益智仁石油醚部位对肾阳虚多尿模型大鼠肾脏、脾脏、胸腺和睾丸指数的改变有显著抑制作用（P<0.05-0.01）,对模型大鼠肾脏和睾丸病理损伤有一定程度的改善,并且可以降低其血清BUN、Cr含量,增加外周血CD3+、CD3+CD4+相对量,降低CD3+CD8+相对量,对肾脏指数和病理改变的治疗作用以盐炙品为佳；益智仁石油醚部位能显著提高肾阳虚多尿模型大鼠血浆AVP和cAMP含量,上调AQP-2mRNA和AVPR-V2mRNA生肾髓质的表达,提高AQP-2和AVPR-V2蛋白的表达,且盐炙后作用均明显增强,辅料盐起到协同增效作用。3采用血清药物化学方法和手段,分离鉴定出盐益智仁石油醚部位的“入血成分”11,12-二羟基圆柚酮。盐炙能加快机体对11,12-二羟基圆柚酮的吸收,增加其生物利用度。结论益智仁温肾缩尿作用的物质基础是石油醚部位,辅料盐起到协同增效作用。该部位可通过改善肾脏病理损伤程度,缓和肾脏排泄功能障碍,提高机体免疫力而达到“温肾”作用；能促进肾阳虚多尿模型大鼠分泌和释放AVP,使机体合成cAMP量增加,从而使肾脏集合管AQP-2蛋白的表达量上升,对水的通透性增强达到“缩尿”作用。益智仁盐炙后“温肾缩尿”作用增强,可能与盐炙能加快“入血成分”11,12-二羟基圆柚酮的吸收,增加其生物利用度有关。创新点本文在中医药理论指导下,运用现代科学技术和方法,开展益智仁盐炙前后温肾缩尿作用的研究,其创新性如下：1从中医整体观出发,设计“温肾”为本,“缩尿”为标的药理指标,充分体现中医“标本兼治”的用药原则,为中药及复方的研究提供一种思路。2从AQP-2基因和蛋白水平进一步揭示了益智仁盐炙“缩尿”作用机制。3从体内过程角度阐明益智仁“生熟有别”,进一步完善了益智仁“盐炙入肾”科学内涵。4在小鼠饲养笼基础上进行适当改进,获得操作方便、经济实惠的大鼠代谢笼装置,并申请实用新型专利。