转录因子Sox2对胃粘膜肠化生表型转变作用的研究

论文摘要

目的:胃粘膜肠上皮化生（Intestinal metaplasia, IM）是肠型胃癌发病机制Correa’s级联反应的一个中间步骤,一般被认为是一种癌前病变,尽管这个问题仍然存在争议。胃粘膜IM发生的机制还没有被详细阐明。如果我们想要预防肿瘤从这些病变中发生,就有必要研究控制这个过程的因子。研究表明干细胞及其后代从胃表型转变为肠表型的过程的启动常常是由转录因子控制的。已有一些关于胃粘膜IM中肠转录因子Cdx1和Cdx2表达及功能方面的研究,但控制胃表型的因子还知之甚少,一个候选者就是含有Sry样HMG盒子的转录因子家族成员之一Sox2基因。我们设计了以下实验来阐明转录因子Cdx2和Sox2是否以及如何调控胃粘膜IM的表型转变。方法:1.使用免疫组化方法检测80例病理学诊断为胃炎、轻度IM、中度IM和重度IM的石蜡包埋胃粘膜标本中SOX2和CDX2蛋白的表达;使用实时荧光定量PCR方法检测40例病理学诊断为胃炎、轻度IM和中重度IM的胃镜活检标本中Sox2和Cdx2mRNA表达。2.使用甲基化特异性PCR检测40例病理学诊断为胃炎、轻度IM和中重度IM的内镜活检胃粘膜组织的启动子区甲基化状态。3.将pcDNA3.1 /Cdx2质粒和Sox2siRNAs分别及共同转染到人胃上皮细胞系GES-1中分别使Cdx2上调和Sox2下调。RT-PCR检测Muc2、Sox2和Cdx2 mRNA的表达改变。将肠杯状细胞标志物Muc2 mRNA的出现,视为完成肠型转化。结果:1. SOX2和CDX2蛋白分别定位于正常胃和肠上皮细胞胞核。胃炎、轻度IM组、中度IM组和重度IM组中SOX2和CDX2蛋白阳性率分别为94.4 % vs5.6%、75%vs50%、23.5%vs85.7%、9.5%vs90.5%,差异有显著性（P<0.05）。在化生腺体中有SOX2蛋白的减少和CDX2蛋白的异位表达。2.胃炎组、轻度IM组、中重度IM组Sox2和Cdx2mRNA水平分别为0.5778±0.0778 vs 0.0517±0.0218、0.1496±0.0384 vs 0.1402±0.0300、0.1131±0.0384vs 0.3453±0.0537,差异有显著性（P<0.05）。随着IM进展,从胃炎、轻度IM到中重度IM中Sox2mRNA逐渐减少,而Cdx2逐渐被上调,二者呈逆相关（r<0）。3.Sox2和Cdx2的启动子甲基化分别出现在33.3%和83%的胃炎,56.25%和62.5%的轻度IM, 83.33%和25%的中重度IM中,差异有显著性（P<0.05）。Sox2和Cdx2 mRNA表达与其启动子区甲基化状态逆相关（r<0）。4.人胃上皮细胞GES-1中,pcDNA3.1 /Cdx2和Sox2siRNAs分别显著上调了Cdx2和下调了Sox2。下调Sox2可以导致Muc2和Cdx2表达上调;而上调Cdx2能够上调Muc2并下调Sox2;下调Sox2和上调Cdx2联合的作用强于二者各自单独的作用。说明肠转录因子Cdx2和胃转录因子Sox2有相互负调控作用,都在胃粘膜IM的形成中起重要作用。结论:1.随着胃IM的进展,有Sox2的表达下调和Cdx2的异位表达。2.表观遗传学机制,尤其是DNA甲基化可能在Sox2和Cdx2的转录调节中起重要作用。3.在胃IM进展中,胃转录因子Sox2和（或）肠转录因子Cdx2在启动胃表型向肠表型转化中都起了重要作用。论文二特异性小干扰RNA体外抑制人胃癌细胞IGF-ⅠR表达的研究目的：胃癌是全世界最常见的恶性肿瘤之一，虽然我国近年其发病率有所下降，但其死亡率仍具各类恶性肿瘤死亡之首。从基因水平上研究胃癌发展的分子学机制可为临床治疗和预防提供理论指导，因而成为当前研究的热点之一。我们观察了特异的siRNAs对人胃癌MGC803细胞IGF-ⅠR基因表达的抑制作用，研究干扰下调IGF-ⅠR对体外培养的胃癌细胞增殖和凋亡的影响。方法：设计并体外合成2条靶向IGF-ⅠR的siRNAs，脂质体法瞬时转染体外培养的MGC803细胞，转染48h后以Western blot法检测细胞IGF-ⅠR蛋白的水平，MTT法检测细胞活力，细胞计数并描记生长曲线，以流式细胞仪（FCM）检测细胞早期凋亡（Annexin V-FITC/PI法）。结果：转染后48h，Western blot检测显示干扰组（siRNA2低剂量组、siRNA2高剂量组、siRNA1组）MGC803细胞IGF-ⅠR蛋白抑制率分别为64．41％±4．11％、74．14％±6．15％、89．8％±4．10％)；转染后第2～5天细胞活力逐渐减少，分别达对照组的49．9％±1．2％、45．9％±4．4％、39．1％±5．1％、29％±4．O％，同期生长曲线显示细胞数分别为对照组的65．58％±4．89％、55．59％±0．82％、44．18％±3．17％、21．15％±1．1％；但FCM检测各组细胞的早期凋亡百分比均<5％，各组之间的凋亡百分比差异未达统计学意义。结论：特异的siRNAs可显著抑制MGC803细胞中的IGF-ⅠR基因的表达，细胞的分裂增殖明显减少，但凋亡没有明显增加。

论文目录

• 论文一 转录因子Sox2对胃粘膜肠化生表型转变作用的研究
• 中文摘要
• Abstract
• 符号说明
• 前言
• 研究现状 成果
• 研究目的 方法
• 一、Sox2和Cdx2在胃粘膜肠上皮化生中的表达
• 1.1 对象和方法
• 1.2 结果
• 1.3 讨论
• 1.4 小结
• 二、胃粘膜肠上皮化生中Sox2和Cdx2启动子区甲基化状态
• 2.1 对象和方法
• 2.2 结果
• 2.3 讨论
• 2.4 小结
• 三、Sox2和Cdx2在胃粘膜肠上皮化生表型转变中的作用
• 3.1 对象和方法
• 3.2 结果
• 3.3 讨论
• 3.4 小结
• 结论
• 参考文献
• 附录
• 论文二 特异性小干扰RNA抑制人胃癌细胞IGF-ⅠR表达的研究
• 中文摘要
• Abstract
• 符号说明
• 前言
• 研究现状 成果
• 研究目的 方法
• 对象和方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 发表论文和参加科研情况说明
• 综述
• 胃粘膜肠上皮化生表型转变机制研究进展
• IGF-ⅠR分子靶向抗肿瘤研究进展
• 综述参考文献
• 致谢