查艳景刘莉
（曲靖医学高等专科学校云南曲靖６５５０００）
【中图分类号】Ｒ１１４【文献标识码】Ｂ【文章编号】１６７２－３７８３（２０１５）０６－０２０１－０１
【摘要】：本文应用蚕豆根尖微核检测茶的遗传毒性方面作了一些研究。以不同品种（绿茶Ⅰ、绿茶Ⅱ、红茶、普洱生茶、普洱熟茶）不同泡数（洗茶汤、一泡茶汤、二泡茶汤）的茶汤处理为实验组，蚕豆根尖细胞微核率的大小表示茶叶遗传毒性的大小。实验表明，茶汤具有一定的遗传毒性。同一品种不同泡数的茶汤处理后，微核率不同（洗茶汤＞一泡茶汤＞二泡茶汤）。绿茶Ⅰ的遗传毒性低于绿茶Ⅱ的遗传毒性，且差异性显著（Ｐ＝０．０３７７５，Ｐ＜０．０５），普洱生茶与普洱熟茶的遗传毒性相当，差异性不显著（Ｐ＝０．２２５４０３，Ｐ＞０．０５）。
【关键词】：微核试验；微核率；污染指数；农药残留；遗传毒性
一、研究目的与意义
近代科学研究表明，茶叶中含有丰富的营养成份以及多种对人体健康有益的物质，这些营养成分是人体正常生长发育所必须的，并可以帮组人体预防和治疗某些疾病，如茶中含有大量的维生素Ｃ可降低胆固醇值，茶叶可预防糖尿病。市场上有许多茶产品，如佳洁士茶爽牙膏、茶多酚片、绿茶洁面乳等。
茶叶是日常生活的必需品，也是我国重要的传统出口商品，但随着人们生活水平的提高，对食品安全问题越来越重视，茶叶中农药残留问题已经成为国际贸易中的技术焦点，各国都制定了茶叶中的农药残留限量标准，检测项目不断增加，要求日趋严格。我国茶叶出口屡遭农药残留超标困扰，农药残留超标问题已经成为我国茶叶出口的一道关卡。
二、实验材料与方法
２．１实验材料
实验材料：松滋青皮豆。
茶叶的品种：绿茶Ⅰ，绿茶Ⅱ，红茶，普洱生茶，普洱熟茶，这些茶叶都是２０１４年的春茶，在市场上随机购买。
２．２研究方法
基本按照《水和废水监测分析方法》进行，并做部分改进。
２．３实验步骤
２．３．１制备蚕豆根尖
（１）实验材料的培育
购松滋青皮豆种子，晒干贮藏于干燥器内或４℃冰箱内备用。
（２）实验材料的选择
将蚕豆从４℃的冰箱中取出，在室温（２０℃－２５℃）下放置４８ｈ，选择颗粒饱满、大小均匀、胚芽无损坏、没有被虫食用的蚕豆干种子。
（３）浸种催芽
将选出的蚕豆放入底部垫洁净纱布的解剖盘中，在解剖盘中加入适量的蒸馏水，淹没蚕豆的３／４即可，置于室温下培养２４ｈ，此间换水３次。种子充分吸胀萌发后，移至解剖盘中覆盖纱布以保持湿度，室温培养。待根长至１－２ｃｍ左右时，选择３２０个初生根尖生长良好、根长一致的蚕豆种子，随机分成１６组，每组２０个备用。
２．３．２处理蚕豆根尖
将上述备用蚕豆留下其中１组用蒸馏水培养作对照组，其余１５组分别用受试液培养，处理２４小时，每隔８ｈ换一次水。
２．４．３蚕豆根尖的恢复培养
将经各受试液处理过的根尖，用蒸馏水浸洗３次，每次２－３ｍｉｎ，将洗净的种子再放入底部垫有纱布培养皿中，盖上纱布在室温下保湿恢复培养２４ｈ。
２．４．４蚕豆根尖的固定与保存
将恢复培养后的蚕豆，剪下根尖１ｃｍ－１．５ｃｍ，用卡诺固定液固定２４ｈ。将固定后的蚕豆根尖用９０％酒精浸洗半小时，再用７０％的酒精浸洗半小时，然后放入７０％的酒精中置于４℃冰箱中保存，酒精的体积约为根尖的１５倍。
２．４．５解离蚕豆根尖
先用蒸馏水浸洗根尖１－２次，然后再用卡诺固定液固定一次，时间３－５分钟；将固定好的蚕豆根尖用蒸馏水浸洗２次，每次５ｍｉｎ，若根尖在冰箱中的储存时间短则不需要再次固定。用１ｍｏｌ／Ｌ盐酸于５０℃水浴箱中解离根尖５ｍｉｎ，再用蒸馏水浸洗２次，每次５ｍｉｎ。
２．４．６徒手制片
取出根尖置于擦净的载玻片上，用解剖针截取２ｃｍ左右根尖分生组织（解离后稍透明部位），用解剖针将其捣碎并均匀的涂开，滴上１－２滴卡宝品红染液，盖上盖玻片，染色５－１０ｍｉｎ后压片。
２．４．７蚕豆根尖的镜检及微核识别标准
制备好的装片置于显微镜上观察，每个待测液培养的根尖装片及对照组装片至少分别镜检１０个根尖，每个根尖装片在高倍镜下观察１０个视野，每个视野中大约１００个细胞，每个装片统计约１０００个细胞中的微核数，并做记录。
微核识别标准：（１）大小为主核的１／３－１／１５，且于主核分离；（２）着色与主核相当或稍浅；（３）形态为圆形、椭圆形、不规则形。
３实验结果
由下图可知，这五种（绿茶Ⅰ、绿茶Ⅱ、红茶、普洱熟茶、普洱生茶）茶叶洗茶汤ＭＣＮ‰都高于各自相对应的一泡茶汤的ＭＣＮ‰，而一泡茶汤又高于相对于的二泡茶汤的ＭＣＮ‰。红茶洗茶汤、一泡茶汤、二泡茶汤的微核率都高于其它品种对应的ＭＣＮ‰；绿茶Ⅰ洗茶汤、一泡茶汤、二泡茶汤的微核率都低于其它品种对应的ＭＣＮ‰。绿茶Ⅰ的微核率比绿茶Ⅱ的微核率低，差异显著（Ｐ＝０．０３７７５，Ｐ＜０．０５）；普洱熟茶与普洱生茶的微核率相差不大，差异性不显著（Ｐ＝０．２２５４０３，Ｐ＞０．０５）。
４结论
（１）通过实验结果分析可知，每个实验组的微核率与对照组相比明显较高，大部分都是中度污染，由此可见，所检测的几种茶叶中都有一定程度的遗传毒性。
（２）实验结果分析得出：同一品种的茶汤从洗茶汤、一泡茶汤到二泡茶汤微核率有下降趋势，茶汤导致微核率由高到低依次为：洗茶汤、一泡茶汤、二泡茶汤，在喝茶时洗茶是必要的。
（３）实验结果分析得出：绿茶Ⅱ的微核率比绿茶Ⅰ的微核率高，且差异显著（Ｐ＝０．０３７７５），说明品质好的茶叶的遗传毒性较低。
（４）实验结果分析得出：普洱熟茶与普洱生茶的微核率相差不大，差异不显著（Ｐ＝０．２２５４０３），说明普洱熟茶和普洱生茶的遗传毒性相当。
参考文献
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