论文题目: Aik2调节细胞周期新途径的研究——互作和磷酸化Septin1
论文类型: 博士论文
论文专业: 遗传学
作者: 祁美艳
导师: 赵寿元
关键词: 磷酸化,突变,胞质分裂,多倍体
文献来源: 复旦大学
发表年度: 2005
论文摘要: 在高等真核生物细胞周期过程中,有丝分裂是很重要的时期,因为它必须保证子细胞接收到完全相同的遗传物质,否则会形成非整倍体或多倍体,而这恰恰容易导致肿瘤发生。有丝分裂是在很短的时间内完成的,这得益于相关蛋白的磷酸化和非磷酸化之间的平衡来精确调节。Aurora/Ipllpkinase(Aik)属于保守的丝氨酸/苏氨酸激酶家族,与染色体的分离和胞浆运动密切相关,激酶的灭活或过量表达易形成多倍体。Aurora-B(Aik2)定位于有丝分裂的中体,抑制其活性导致形成多核细胞,提示其与胞质分裂有关。 我们通过酵母双杂交法筛选到Septinl是Aik2的互作蛋白,Septinl是在筛选酵母菌影响胞质分裂的温度敏感型突变时发现的,也称为第四类细胞骨架蛋白,与出芽位点的选择、胞质分裂相关。哺乳动物的Septinl定位在有丝分裂的收缩环附近,参与胞质分裂的完成,突变后细胞形成多倍体并通过免疫共沉淀和GST-Pull down法进一步得到证实。Aik2可磷酸化Septinl,Ser-307、315是重要的磷酸化位点。Septinl被磷酸化后可反馈性地增强激酶活性,而突变体则没有这种反馈性的效应。细胞内定位显示:Septinl在有丝分裂前定位于中心粒,后慢慢迁移至核周围。在有丝分裂中期位于赤道板,后期位于中间体及末期的后有丝分裂桥,磷酸化位点的突变没有影响自身和Aik2的定位。突变体的瞬时表达提高G2/M期细胞的比例,多倍体的比例也明显增加,可能是由于胞质分裂不能快速有效地完成,部分细胞形成多倍体。有趣的是,死亡细胞和凋亡细胞也明显增加,可能是细胞检测到Septinl的突变,无法通过某些重要的检测点而启动凋亡。Septinl是Aik2的细胞内底物,二者共同参与调控胞质分裂。
论文目录:
摘要(中文)
摘要(英文)
前言
材料和方法
1.材料和试剂
2.主要仪器设备
3.主要的计算机分析软件
4.技术路线和实验方法
结果
1.酵母双杂交体系筛选Aik2的互作蛋白
2.Septin1蛋白的结构域分析
3.免疫共沉淀验证Aik2和Septin1之间的相互作用
4.GST-Pull Down验证Septin1和Aik2的体外结合
5.Septin1蛋白的磷酸化位点预测及验证
6.体外磷酸化确定Septin1蛋白的主要磷酸化位点
7.Septin1蛋白被磷酸化后可反馈性地增强Aik2的激酶活性
8.不同时期Septin1蛋白的细胞内定位
9.Aik2和Septin1的细胞内共定位图
10.流式细胞仪检测Septin1及其突变体对细胞周期的影响
11.流式细胞仪检测Septin1及其突变体对细胞凋亡的影响
讨论
小结
参考文献
综述1：Aurora家族成员——与有丝分裂和肿瘤发生紧密相关的丝氨酸苏氨酸激酶研究进展
综述2：RNA干扰的研究进展
致谢
论文独创性声明
论文使用授权声明
发布时间: 2005-09-19
参考文献
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