抗感菌核病近等基因系油菜蛋白差异的研究

论文摘要

油菜属于十字花科（Cruciferae）,芸苔属（Brassica）,是世界广泛种植的油料作物,是重要的食用油源和蛋白质饲料来源,也是重要的工业原料。提高油菜的产量,就是直接提高了油菜的生产效益。然而油菜菌核病[Sclerotinia sclerotiorum（Lib）de Bary]严重的影响了油菜的产量,它有油菜生产中的癌症之称。本研究以98c40、98c40×M004的近等基因系,98c40、98c40×湘油15的近等基因系为材料,用TCA-丙酮沉淀法对这两套近等基因系油菜样品的叶片提取了全蛋白质,以Bio-Rad高通量双向电泳系统为技术平台,建立了适合油菜叶片全蛋白的高分辨率和高重复性的双向电泳技术体系。得到了清晰的油菜叶片蛋白双向电泳图谱。通过PDquest软件对双向电泳图谱进行分析,寻找到了98c40与98c40×M004的近等基因系,两者间共有15个差异蛋白点,其中有14个蛋白点仅在98c40上表达,而在98c40×M004的近等基因上没有表达,只有1个蛋白点仅在98c40×M004的近等基因上表达,而在98c40上没有表达。还在它们之间发现表达差异在5倍量或以上的蛋白点10个。98c40与98c40×湘油15的近等基因系,两者之间有7个差异蛋白点,其中6个蛋白点仅在98c40上表达,而在98c40×湘油15的近等基因系上无表达,只有1个蛋白点在98c40×湘油15的近等基因系上表达,而在98c40上无表达。且表达差异在5倍量或以上的蛋白点7个。并且对两套近等基因系的其中的14个差异蛋白点进行质谱鉴定,鉴定出其蛋白的名称。从而探讨性的提出这些蛋白在油菜抗菌核病中的作用,为下一步转基因抗菌核病的育种工作提供了一定的依据。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 文献综述
• 1. 油菜抗菌核病育种研究进展
• 2. 菌核菌的致病机理
• 2.1 侵染方式及过程
• 2.2 致病机理
• 3. 油菜的抗病机理
• 3.1 预存防卫系统
• 3.2 诱导防卫系统
• 3.3 避病
• 4. 蛋白质组学
• 4.1 蛋白质组研究的方法
• 4.2 双向凝胶电泳的发展及在蛋白质组学上的应用
• 4.2.1 样品的制备及溶解
• 4.2.2 双向凝胶电泳
• 4.3 质谱技术在蛋白质组学上的应用
• 4.4 植物抗病蛋白质组学
• 第二章 近等基因系油菜全蛋白的提取及双向电泳
• 1. 材料与方法
• 1.1 实验材料
• 1.2 试剂与仪器
• 1.3 溶液的配置
• 2. 实验方法
• 2.1 油菜叶片全蛋白质的提取和溶解
• 2.1.1 油菜叶片全蛋白质的提取—采用三氯乙酸/丙酮沉淀
• 2.1.2 蛋白质的溶解
• 2.2 采用Bradford法测定所得样品的蛋白浓度
• 2.2.1 溶液的配置
• 2.2.2 标准曲线的制作
• 2.2.3 检测蛋白样品的浓度
• 2.3 双向凝胶电泳
• 2.3.1 试剂与仪器
• 2.3.2 溶液的配置
• 2.3.3 第一向等电聚焦电泳（IEF）
• 2.3.4 胶条的平衡
• 2.3.5 第二向SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳
• 2.3.6 凝胶的染色—考马斯亮蓝G-250染色法
• 2.4 油菜叶片双向电泳IPG胶条的选择
• 3. 双向电泳结果讨论
• 4. PDQuest软件分析两套近等基因系油菜蛋白的差异
• 第三章 差异蛋白点的质谱鉴定
• 1. 材料与方法
• 1.1 实验材料
• 1.2 试剂与仪器
• 1.3 溶液的配置
• 2. 实验方法
• 2.1 酶解
• 2.2 提取肤段
• 2.3 HCT质谱鉴定差异蛋白点
• 3. 结果讨论
• 4. 展望
• 参考文献
• 致谢
• 作者简介