非酒精性脂肪性肝病的应用基础研究

论文摘要

研究背景与目的非酒精性脂肪性肝病（nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD）是指除外酒精和其他明确的损肝因素所致的,以弥漫性肝细胞大泡性脂肪变为主要特征的临床病理综合征,其疾病谱包括单纯性脂肪肝、脂肪性肝炎、脂肪性肝纤维化及肝硬化等。随着生活水平的提高和生活习惯的改变,NAFLD的患病率逐年升高,已成为一个全球性的公共卫生问题。NAFLD的发生与肥胖、2型糖尿病、高血压等代谢性疾病关系密切,但其发病危险因素尚未完全阐明。B超和CT等影像学方法对诊断NAFLD有一定帮助,但不能有效地区分各种疾病阶段;肝组织活检仍然是当前诊断NAFLD的金标准,但由于肝组织活检具有一定的创伤性,其临床应用受到限制;因此临床上迫切需要寻找一些高灵敏度和特异性的无创性NAFLD诊断方法。NAFLD以肝脏脂肪变性为主要特征,肝脏脂肪变性可对许多临床实践造成影响,其中肝脏缺血再灌注损伤是肝叶切除、肝外伤处理、肝移植过程中经常遇到的问题,缺血预处理在一定程度上可减轻肝脏缺血再灌注损伤,但是不同程度肝脏脂肪变性是否对缺血预处理的保护作用造成影响目前尚不明确。本课题围绕NAFLD发病危险因素分析、血清诊断标志物筛选、肝脏脂肪变性对缺血预处理保护作用的影响三部分内容开展研究。研究方法在NAFLD发病危险因素分析方面,我们进行了一项样本量为8925人的横断面研究;通过比较NAFLD人群与对照人群血清尿酸水平的差异,以及不同尿酸水平人群NAFLD患病率的差异,并作NAFLD危险因素分析,以分析血清尿酸水平变化与NAFLD之间的可能联系。在NAFLD血清诊断标志物筛选方面,我们收集了35份经肝脏组织学证实的NAFLD患者血清标本和35份正常对照血清标本,采用SELDI结合生物信息学分析,以筛选NAFLD血清诊断标志物。在肝脏脂肪变性对缺血预处理保护作用的影响方面,我们运用胆碱和蛋氨酸缺乏饮食建立了不同程度的小鼠肝脏脂肪变性模型,动态观察缺血预处理对肝脏保护作用的变化,并进一步分析缺血预处理对肝脏ATP含量及ATP5B蛋白表达的作用,为揭示肝脏脂肪变性对缺血预处理保护作用的影响机制提供线索。结果横断面研究发现,NAFLD人群的血清尿酸水平明显高于对照人群（370.3±86.6vs.321.1±82.6μmol/L;P＜0.001）;高尿酸血症人群的NAFLD患病率明显高于非高尿酸血症人群（24.75%vs.9.54%;P＜0.001）,且NAFLD患病率随血清尿酸水平上升而增高（P＜0.001）;多因素回归分析显示,高尿酸血症与NAFLD发病的危险因素有关（OR:1.291,95%CI:1.067-1.564;P＜0.001）。SELDI结果发现,NAFLD患者组与正常对照组血清存在135个差异质荷比峰（上调59个/下调76个）;借助生物信息学软件,我们建立了一个基于血清蛋白质指纹图谱的NAFLD诊断模型,该模型敏感性和特异性分别为92.0%和88.O%;进一步的盲法验证也显示该诊断模型具有较高的灵敏度和特异性。动物实验结果提示,肝脏缺血再灌注损伤程度随肝脏脂肪变性程度的加重而加重,主要表现为血清ALT、AST水平的升高及肝脏病理学改变的加重;缺血预处理能显著减轻正常肝脏和轻度脂变肝脏的缺血再灌注损伤,而对于中度和重度脂变肝脏,缺血预处理的保护作用消失;肝脏ATP含量及ATP5B表达变化趋势与血清肝功能酶谱及肝脏病理学变化趋势一致,提示不能有效改善肝脏能量代谢可能是缺血预处理保护作用消失的一个重要原因。结论综上,本研究得出以下结论:（1）大样本横断面研究证实了血清尿酸水平升高与NAFLD密切相关,且高尿酸血症是NAFLD发病的独立危险因素;（2）运用SELDI结合生物信息学分析建立了一个具有较高灵敏度和特异性的NAFLD血清蛋白质指纹图谱诊断模型;（3）动物实验发现,肝脏脂肪变性是缺血再灌注损伤和预处理保护作用的重要影响因素。本研究的相关结果,为深入认识NAFLD提供了新的理论依据和实践探索。

论文目录

• 致谢
• 序言
• 中文摘要
• 英文摘要
• 缩略表
• 正文第一部分:Association of serum uric acid level with nonalcoholic fatty liver disease:A cross-sectional study
• 1.1 Introduction
• 1.2 Materials and Methods
• 1.3 Results
• 1.4 Discussion
• 1.5 References
• 正文第二部分:Identification of potential biomarkers for nonalcoholic fatty liver disease using SELDI-TOF-MS
• 2.1 Introduction
• 2.2 Materials and Methods
• 2.3 Results
• 2.4 Discussion
• 2.5 References
• 正文第三部分:Impact of hepatic steatosis on protective effect of ischemic preconditioning against ischemia/reperfusion in mice
• 3.1 Introduction
• 3.2 Materials and Methods
• 3.3 Results
• 3.4 Discussion
• 3.5 References
• 综述部分:Current studies on therapeutic approaches for ischemia reperfusion injury in steatotic livers
• REFERENCES
• 附录Ⅰ:主要实验仪器及常用试剂配置
• 附录Ⅱ:主要实验方法操作流程
• 附录Ⅲ:作者简历