药物诱导性反转鸡、鹌鹑及其属间杂交种胚胎性别相关基因表达规律的研究

论文摘要

禽类的胚胎发育过程十分复杂,导致胚胎死亡的因素是多方面的。鸡与鹌鹑属间杂交的早期胚胎发育过程有一个死亡高峰期,至出壳后鉴定个体全部为雄性且完全不育,这些现象用普通意义上的胚胎死亡原因无法解释。本研究主要从形态学上观察鸡与鹌鹑属间杂交种的形态发育差异,通过胚蛋注射的方法对鸡、鹌鹑以及其属间杂交种胚胎进行处理,观察Formestane和17p-estradiol对其性别分化的影响,探讨ER等基因在鸡、鹌鹑以及其属间杂交种胚胎药物处理前后基因表达规律与鸡与鹌鹑属间杂交种胚胎早期死亡的关系而展开本实验。1鸡、鹌鹑以及其属间杂交种胚胎发育的形态学观察目前关于鸡和鹌鹑胚胎发育形态的研究已有较详细的报道,但对杂交禽胚胎发育形态的实验研究未见报道。本实验以杂交禽、鹌鹑和鸡为实验材料,从其入孵至出雏,取活体胚胎做解剖和拍照,通过解剖显微镜观察其发育特征,进行比较分析,结果表明：杂交禽、鹌鹑以及鸡的胚胎从整体上观察,形态发育差异不大；时间上比较,杂交禽发育进程比鸡的快比鹌鹑慢,并且在9天之前差异较大。2 Formestane和17β-estradiol诱导鸡、鹌鹑胚胎性反转的研究性激素对孵化早期的家禽胚胎性别有很大影响,给止常孵化的鸡、鹌鹑种蛋注射17β-雌二醇和芳香化酶抑制剂,可分别将其性别诱导为雌性和雄性。为了研究验证Formestane和17β-estradiol对鸡和鹌鹑胚胎性分化的影响,本试验根据家禽性别分化的机理,利用100μg/ml的Formestane和50μg/ml的17β-estradiol,通过胚蛋注射的方法对3日龄的鸡胚和2日龄的鹌鹑胚进行处理,观察Formestane和17β-estradiol对鹌鹑性别分化的影响。结果表明,注射Formestane和17β-estradiol的鸡胚和鹌鹑胚都发生了性反转。同时对杂交禽也采取和鹌鹑同样的方法进行处理,但结果显示死亡率很高,出壳率基本为零。据此推测,注射药物引起基因表达紊乱很可能也是杂交种全部死亡的原因之一3ER、3(3-HSD、P450c17和P450arom基因的表达量分析鸟类胚胎的性分化在早期受性激素影响,特别是雌激素在性分化中起着非常重要的作用。而体内雌激素一般是由胆固醇转化产生,这一转化过程需要羟基类固醇脱氢酶（在家禽中主要有3β-HSD及P-450c17等类固醇类基因）和P450arom基因的作用。本实验采集72、96、120、144、168、192h的鸡、鹌鹑和杂交种胚胎各10枚,在胚胎性别鉴定的基础上,运用实时荧光定量PCR方法检测ER、3β-HSD、P450c17和P450arom四个基因的表达量,发现作为ER的调控基因,3β-HSD、P450arom和P-450c17基因的表达在杂交种中都表现出提前表达的趋势,而ER既提前表达,而且其表达的量也表现出与其亲本有较大差异,同时其表达的时间与其胚胎死亡的时间基本吻合,因此可以猜测ER很可能在杂交种胚胎早期死亡中起着较为关键的作用。4凋亡因子bcl-2和p53基因的表达量分析鸡和鹌鹑胚胎发育早期各个时间段bcl-2、P53基因表达模式的研究尚未见报道,本试验采集72、96、120、144、168、192h的鸡、鹌鹑和杂交种胚胎各10枚,在胚胎性别鉴定的基础上,运用实时荧光定量PCR方法检测bcl-2和p53基因的表达量,发现雌性胚胎bcl-2表达高峰点与其P53表达最低水平相吻合；与鸡和鹌鹑胚胎比较,杂交胚胎在72、120 h bcl-2、P53基因表达出现异常,因此可以猜测bcl-2、P53基因异常表达很可能也是引起杂交种胚胎早期死亡的原因之一5性诱导后ER等基因的表达量分析性激素在鸟类早期胚胎的性分化过程中有很大的影响,本试验采用荧光定量PCR方法研究外源激素处理的鸡和鹌鹑胚胎不同时期的ER、3β-HSD、P450c17、P450arom、bcl-2和p53基因表达,发现和正常情况下比较,ER等基因表达出现紊乱,这种情况与外源激素处理的鸡和鹌鹑胚胎死亡率高基本吻合,可以猜测这也可能是引起药物注射后杂交胚胎死亡率高,出壳率基本为零的原因。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 目录
• 本文部分缩写的中英文对照
• 前言
• 第一章 文献综述
• 1 鸡与鹌鹑属间杂交种的研究进展
• 2 家禽胚胎的形态学的研究进展
• 3 家禽的性别控制的研究进展
• 4 雌激素受体及相关基因的研究进展
• 5 凋亡因子bcl-2、P53的研究进展
• 6 基因表达量分析研究背景及现状
• 第二章 杂交禽、鹌鹑与鸡胚胎发育的形态学观察
• 1 材料及方法
• 2 结果与分析
• 3 讨论与小结
• 第三章 Formestane和17β-estradiol诱导鸡、鹌鹑胚胎性反转的研究
• 1 材料与方法
• 2 结果与分析
• 3 讨论与小结
• 第四章 ER等基因的表达量分析
• 1 材料与方法
• 2 结果与分析
• 3 讨论与小结
• 第五章 凋亡因子bcl-2和p53基因的表达量分析
• 1 材料与方法
• 2 结果与分析
• 3 讨论与小结
• 第六章 性诱导后ER等基因的表达量分析
• 1 材料与方法
• 2 结果与分析
• 3 讨论与小结
• 全文结论
• 创新
• 参考文献
• 作者简介
• 致谢
• 导师评阅表