重组人B淋巴细胞刺激因子（hsBLyS）对B淋巴细胞的免疫调节作用及其机制研究

论文摘要

本文通过离体原代培养的小鼠脾脏B淋巴细胞和小鼠为实验对象,运用细胞培养、流式细胞分析、激光共聚焦显微镜分析等免疫学和细胞学技术,综合研究和观察了hsBLys在离体和在体条件下对B淋巴细胞的增殖、存活和分化的活性作用及其胞内Ca2+信号变化,从多个角度探讨了hsBLyS对免疫细胞特别是B淋巴细胞的发育分化乃至整体免疫系统的调控作用及其作用机制。结果如下: 1 hsBLyS对离体脾B淋巴细胞增殖及存活的影响 用带有抗CD19的磁珠分离脾脏的B淋巴细胞,调整细胞浓度至1×105个/ml,适应性培养4h后加入hsBLyS或/和anti-IgM的不同浓度的工作液,继续培养一定时间后MTT法检测光吸收值。结果表明:hsBLys单刺激能够诱导B淋巴细胞增殖,且hsBLyS在0.5-2μg/ml浓度范围内随着浓度升高而加强;hsBLyS+anti-IgM共刺激脾脏B细胞虽没有增殖,但进一步在LPS刺激后表现出增殖明显升高,其刺激指数极显著高于对照组:hsBLyS在体外可以延长B淋巴细胞的存活时间。提示:hsBLyS能够诱导体外培养的脾脏B淋巴细胞的存活和增殖,hsBLyS+anti-IgM共同作用能增强B淋巴细胞免疫活性。 2 hsBLyS单体及三聚体对离体脾B淋巴细胞作用比较 用带有抗CD19的磁珠分离脾脏的B淋巴细胞,调整细胞浓度至1×105个/ml,适应性培养4h后加入hsBLyS单体或三聚体以及anti-IgM的不同浓度的工作液,继续培养一定时间后MTT法检测光吸收值。结果表明:加入hsBLvS三聚体培养的B细胞的增殖活性高于或显著高于对照组,而加入hsBLvS单体的B细胞与对照组相比变化不明显。提示:比较hsBLyS单体和三聚体对B淋巴细胞增殖变化,确认hsBLyS主要是以三聚体形式发挥生物学活性。 3 hsBLyS对离体脾脏B淋巴细胞分化的作用 实验分两个系列。系列一:将分离的脾脏细胞悬液加入24孔细胞培养板,随机分为对照组、2.5μg/ml hsBLyS组、2.5μg/ml anti-IgM组和2.5μg/mlhsBLyS+2.5μg/ml anti-IgM组,每组3个平行孔,分别加入PBS、hsBLyS和/或anti-IgM工作液,培养72h。系列二:分组同系列一,只是在加入工作液培养24h之后,吸去各孔上清再加入LPS继续培养48h。培养结束后,各孔加入anti-CD45R/B220和anti-CD21单克隆荧光抗体标记,流式细胞仪分析hsBLyS对B淋巴细胞分化的影响。结果表明:加入hsBLyS诱导B淋巴细胞总体数量明显高于对照组;B220+CD21loB淋巴细胞（T1 B淋巴细胞）数量虽略高于对照

论文目录

• 摘要
• Summsry
• 引言
• 第一部分 文献综述
• 第一章 B淋巴细胞及其免疫应答反应
• 1 B细胞的分化
• 1.1 祖 B细胞
• 1.2 前 B细胞
• 1.3 不成熟 B细胞
• 1.3 成熟 B细胞
• 1.5 活化 B细胞
• 1.6 浆细胞
• 2 B细胞的活化
• 2.1 TD-Ag诱导的活化
• 2.2 TI-Ag诱导的B细胞活化
• 2.3 B细胞的活化与抗体产生
• 3 B细胞的免疫应答反应
• 3.1 B细胞免疫功能缺陷
• 3.2 B细胞自身免疫性疾病
• 第二章 B淋巴细胞刺激因子及其免疫调节作用进展
• 1 BLyS的基因、蛋白结构及组织分布
• 2 BLyS的免疫调节作用
• 2.1 BLyS对 B淋巴细胞的免疫调节作用
• 2.2 BLy S对 T淋巴细胞的免疫调节作用
• 2.3 BLyS在动物模型中的免疫调节作用
• 2.3.1 BLyS对正常小鼠模型的免疫调节作用
• 2.3.2 BLyS对转基因小鼠模型的免疫调节作用
• 2.3.3 BLyS缺陷小鼠模型的B淋巴细胞状态
• 2.4 BLyS免疫调节作用的信号转导通路
• 第三章 B淋巴细胞刺激因子与疾病的关系及应用前景
• 1 BLyS与疾病的关系
• 2 BLyS的应用前景
• 参考文献
• 第二部分 实验研究
• 第四章 hsBLyS对离体脾 B淋巴细胞功能活性的影响
• 摘要
• 1 材料与方法
• 1.1 实验动物
• 1.2 主要药品与试剂
• 1.3 原代 B淋巴细胞的分离和培养
• 1.4 hsBLyS对 B淋巴细胞的增殖实验
• 1.5 hsBLyS延长 B淋巴细胞的存活实验
• 1.6 hsBLyS和anti-IgM共刺激作用B淋巴细胞活性作用
• 1.7 hsBLyS单体和三聚体对 B淋巴细胞作用的比较
• 1.8 数据处理
• 2 结果
• 2.1 hsBLyS对 B淋巴细胞增殖的影响
• 2.2 hsBLyS对 B淋巴细胞的存活作用
• 2.3 hsBLyS和anti-IgM共刺激B淋巴细胞的活性作用
• 2.4 hsBLyS单体和三聚体对 B淋巴细胞的增殖作用比较
• 3 讨论
• 参考文献
• Abstract
• 第五章 hsBLyS对离体脾脏 B淋巴细胞分化的作用
• 摘要
• 1 材料与方法
• 1.1 实验动物
• 1.2 主要药品与试剂
• 1.3 原代 B淋巴细胞的分离和培养实验
• 1.4 单克隆荧光抗体标记
• 1.5 流式细胞仪分选测定
• 1.6 数据分析
• 2 结果
• 2.1 hsBLyS对离体脾脏 B淋巴细胞分化的影响
• 2.2 LPS对hsBLyS诱导的离体脾脏 B淋巴细胞分化的影响
• 3 讨论
• 参考文献
• Abstract
• 第六章 hsBLyS对小鼠脾脏 B淋巴细胞和 NK细胞功能活性的影响
• 摘要
• 1 材料与方法
• 1.1 主要药品与试剂
• 1.2 实验动物
• 1.3 样品采集和处理
• 1.4 测定指标和方法
• 1.4.1 MTT法测定 B淋巴细胞的增殖
• 1.4.2 流式细胞仪分选 B淋巴细胞分化
• 1.4.3 乳酸脱氢酶释放法检测 NK细胞活性
• 1.5 数据分析
• 2 结果
• 2.1 小鼠表现及体重变化
• 2.2 hsBLyS对小鼠脾脏B淋巴细胞增殖的影响
• 2.3 hsBLyS对小鼠脾脏B淋巴细胞分化的影响
• 2.4 hsBLyS对小鼠脾脏NK细胞活性的影响
• 3 讨论
• 参考文献
• Abstract
• 2+信号机制探讨'>第七章 hsBLyS促进 B淋巴细胞功能活性的胞内Ca²⁺信号机制探讨
• 摘要
• 1 材料与方法
• 1.1 实验动物
• 1.2 主要药品与试剂
• 1.3 脾脏淋巴细胞悬液制备
• 1.4 hsBLyS作用淋巴细胞
• 1.5 特异性标记 B淋巴细胞
• 1.6 Fluo-3/AM负载
• 1.7 激光扫描共聚焦显微镜断层扫描
• 1.8 图像分析与数据处理
• 2 结果
• 2.1 B淋巴细胞荧光影像和透视影像
• 2+]_I影响的荧光影像'>2.2 hsBLyS对B淋巴细胞[Ca²⁺]_I影响的荧光影像
• 2+]_I荧光强度的变化'>2.3 hsBLyS作用B淋巴细胞[Ca²⁺]_I荧光强度的变化
• 3 讨论
• 参考文献
• Abstract
• 全文结论
• 致谢
• 附1