转化生长因子β1与支气管哮喘及哮喘相关表型关系的研究

论文摘要

哮喘是多基因参与的具有遗传易感性的一组临床综合症,受到基因-基因、基因-环境交互作用的影响。哮喘的两大特征是气道慢性非特异性炎症和气道重塑,临床上以血清IgE增高、肺组织嗜酸性粒细胞浸润、黏膜高分泌和气道高反应为主要表现。尽管对这一复杂疾病有了一定了解,但其具体发病机制仍不清楚。转化生长因子β1（transforming growth factor-β1,TGF-β1）是一种多功能细胞因子,具有抗炎和促炎双重作用而参与哮喘气道炎症与免疫应答。另外,TGF-β1又因其独特的促纤维化作用而参与哮喘的气道重塑,因而与哮喘的关系十分密切。但是TGF-β1在哮喘发生发展中究竟扮演怎样的角色,各家意见不一,有必要对其进一步深入研究。CD4+CD25+调节性T细胞（Treg）在维持免疫稳态中有重要作用,其表面分子膜型TGF-β1在介导细胞接触免疫抑制机制中发挥极其重要的作用。关于CD4+CD25+调节性T细胞表面膜型TGF-β1的表达与哮喘及哮喘相关表型的关系尚未见报道。做为哮喘的候选基因,TGF-β1单核苷酸基因多态性（singlenucleotide polymorphism,SNP）与哮喘及其相关表型的关系被广泛研究,但是不同的研究其结果并不一致甚至截然相反。目前尚无关于中国东南部汉族人群TGF-β1 SNP/单倍型以及和其他基因交互作用对哮喘发病危险度影响的报道,也尚无TGF-β1 SNP/单倍型与哮喘临床表型相关性研究的报道。鉴于此,本研究将从这几方面入手,揭示TGF-β1与哮喘及哮喘相关表型的关系,进一步阐明TGF-β1在哮喘发生发展中的作用。第一部分膜型TGF-β1和其他表面标志在过敏性哮喘患者外周血CD4+CD25high调节性T细胞上的表达以及吸入激素对其的影响研究背景:CD4+CD25+调节性T细胞（Treg）能通过其表面分子如TGF-β1、细胞毒T淋巴细胞相关抗原4（CTLA-4）和糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体家族相关蛋白（GITR）发挥细胞一细胞接触性免疫抑制,但是对Treg在哮喘发病机制中的确切作用仍知之甚少。目的:比较过敏性哮喘患者和正常人外周血Treg表面分子表达之间的差异,以及吸入激素对其的影响,同时分析这些表面分子表达与哮喘表型的相关性。方法:用流式细胞技术检测CD4+CD25highTreg表面分子的表达。体内和体外实验观察吸入激素对Treg表面分子表达的影响。血浆总IgE和超敏C反应蛋白（hsCRP）分别用ELISA和乳胶增强免疫比浊法测定。结果:急性期和稳定期过敏性哮喘患者外周血Treg的数量与正常人相似。与CD4+CD25-T细胞相比,Treg优先表达TGF-β1/LAP、CTLA-4、GITR、TLR4和FOXP3。急性期哮喘患者的CD4+CD25highLAP+T细胞数量较稳定期患者和正常人显著减少。吸入激素治疗可使CD4+CD25highLAP+T细胞比例增加,在体外受激素刺激后能增殖并呈剂量依赖关系。另外,CD4+CD25highLAP+T细胞比例与哮喘患者血浆总IgE及哮喘严重度分级呈负相关,与FEV1%呈正相关。结论:结果显示膜型TGF-β1可能是一个预测哮喘严重度的有效指标,并且可能与哮喘持续缓解有关。针对Treg表面分子（尤其是TGF-β1）的策略可能是将来哮喘治疗有希望的手段。第二部分TGF-β1单核苷酸多态性与哮喘易感性的关系以及和CD14之间的交互作用研究背景:哮喘是多基因控制的具有遗传易感性的疾病。TGF-β1是哮喘候选基因之一,虽然有不少关于TGF-β1单核苷酸多态性（SNP）与哮喘易感性的相关性研究,但是结果却很不一致。目的:研究在中国东南部汉族人群中TGF-β1 SNP/单倍型与哮喘发病危险性的关系,以及TGF-β1与CD14之间的基因-基因交互作用对哮喘易感性的影响。方法:连续性招募318名哮喘患者和352名正常志愿者。挑选TGF-β1三个多态性位点rs1800469、rs1982073和rs12983047,CD14一个位点rs2563298,采用SNPstream和TaqManSNP分型法进行基因分型。通过病例-对照设计分析这些位点和哮喘易感性的关系,以及TGF-β1与CD14之间的基因-基因交互作用。结果:TGF-β1三个多态性位点以及CD14的一个位点的等位基因、基因型频率在哮喘组和对照组中没有差别。TGF-β1单倍型分析与哮喘的发病危险度也无相关性。TGF-β1 rs1800469和CD14 rs2563298之间有强烈的交互作用（校正OR=8.23,95%CI=2.68-25.30）,同时携带TGF-β1rs1800469 TT和CD14 rs2563298 CA/AA基因的人群发生哮喘的危险性要比同时携带TGF-β1 rs1800469 TT和CD14rs2563298 CC者低81%（校正OR=0.19,95%CI=0.07-0.55）。rs1982073和rs1800469之间高度连锁（D’=0.99）,因而与CD14rs2563298之间也有相等强度的交互作用。结论:中国东南部汉族人群中,TGF-β1单核苷酸基因多态性单独与哮喘易感性无相关性,但和CDl4之间存在交互作用,共同影响哮喘的发生。这对筛选哮喘高危人群和哮喘的预防有重要意义。第三部分TGF-β1单核苷酸多态性与哮喘相关表型的关系研究背景:虽然在中国东南部汉族人群中,TGF-β1单核苷酸基因多态性与哮喘易感性无相关性（见第二部分）,但是有部分研究显示TGF-β1单核苷酸多态性与哮喘的一些临床表型相关。目的:探讨TGF-β1 SNP与中国东南部汉族哮喘患者外周血CD4+CD25highLAP+T细胞比例、血浆总IgE、血浆TGF-β1、外周血嗜酸性粒细胞、肺功能、过敏原皮肤点刺试验（SPT）及哮喘严重度分级的关系。方法:连续性招募318名哮喘患者。挑选TGF-β1三个多态性位点rs1800469、rs1982073和rs12983047,采用SNPstream和TaqManSNP分型法进行基因分型。CD4+CD25highLAP+T细胞比例用流式细胞技术检测,血浆总IgE和TGF-β1水平采用ELISA测定。通过单纯病例设计分析TGF-β1 SNP和哮喘相关临床表型的关系。结果:和TT或TC基因型相比,携带rs1800469 CC基因型的哮喘患者外周血CD4+CD25highLAP+T细胞比例明显增高（P＜0.001）。同样,携带rs1982073 TT基因型的哮喘患者该细胞群的比例较CC和CT者高（P＜0.001）。rs12983047 AG/GG携带者的FEV1/FVC比AA略高（P=0.034）。未发现TGF-β1三个多态性位点与哮喘其他表型有相关性。结论:TGF-β1单核苷酸多态性与哮喘患者外周血CD4+CD25high调节性T细胞表面膜型TGF-β1/LAP的表达相关,与哮喘其他表型无关。TGF-β1单核苷酸多态性可能通过影响CD4+CD25high调节性T细胞表面膜型TGF-β1/LAP的表达在哮喘的发病机制中起重要作用。

论文目录

• 主要英文缩略词语
• 中文摘要
• 英文摘要
• 引言
• +CD25^high调节性T细胞上的表达以及吸入激素对其的影响'>第一部分 膜型TGF-β1和其他表面标志在过敏性哮喘患者外周血CD4⁺CD25^high调节性T细胞上的表达以及吸入激素对其的影响
• 材料和方法
• 结果
• 讨论
• 第二部分 TGF-β1单核苷酸多态性与哮喘易感性的关系以及和CD14之间的交互作用
• 材料和方法
• 结果
• 讨论
• 第三部分 TGF-β1单核苷酸多态性与哮喘相关表型的关系
• 材料和方法
• 结果
• 讨论
• 小结
• 参考文献
• 附录
• 致谢
• 综述及论著