雷帕霉素对体外培养的兔晶体上皮细胞增殖的影响

论文摘要

目的 雷帕霉素是一种新型的大环内酯类免疫抑制剂,近年来被广泛运用于器官移植、恶性肿瘤治疗、预防冠状动脉狭窄等,眼科已有研究应用于动物的角膜移植。后发性白内障是白内障术后最严重的并发症之一,其原因是由于白内障术后残留的晶体上皮细胞增殖、移行、转化,从而在后囊膜上形成纤维膜,严重影响术后视力的恢复。本研究在体外培养兔晶体上皮细胞的基础之上,旨在研究兔晶体细胞的体外生长特性,观察不同浓度雷帕霉素对晶体上皮细胞形态、增殖等生物学活性的影响,并对其可能的作用机制加以初步探讨,为临床阐明后囊混浊的发病机理和探讨防治措施提供实验依据。 方法 晶体上皮细胞来自健康成年兔（1.5kg-2.0kg）的晶体囊膜,将其放入DMEM培养基中培养,达汇合点后细胞传代,第2-3代细胞用于实验。 （1）用组织块培养法进行兔晶体上皮细胞的原代培养,光镜下观察细胞的形态。 （2）将2-3代兔晶体上皮细胞以5×104个/ml接种于96孔板,24小时后分别加入雷帕霉素（0ng/ml,5ng/ml,10ng/ml,20ng/ml,40ng/ml,80ng/ml）。加药后于培养24小时后,光镜下观察细胞形态,以MTT法测细胞增殖活性。 （3）将2-3代兔晶体上皮细胞以5×104个/ml接种于铺有玻片的6孔板中,24小时后分别加入雷帕霉素（0ng/ml,5ng/ml,10ng/ml,20ng/ml,40ng/ml,80ng/ml）。加药后于培养24小时后,光镜下观察细胞形态,取出细胞爬片,行HE染色,并以免疫组化SP法对PCNA进行检测。 （4）取雷帕霉素（0ng/ml,20ng/ml）处理过的兔晶体上皮细胞各106个,以流式细胞仪测细胞周期。 （5）取雷帕霉素（0ng/ml,5ng/ml,10ng/ml,20ng/ml,40ng/ml,80ng/ml）处理过的兔晶体上皮细胞各106个,以RT-PCR测P27kipl mRNA的表达。

论文目录

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• 结果
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• 结论
• 附录、附图
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