论文摘要
为了探讨星形胶质细胞直接作为基因靶细胞进行目的基因的表达。我们用RT-PCR 的方法扩增大鼠BDNF 基因,构建真核表达质粒PCI-neo/BDNF,将BDNF 重组质粒转染星形胶质细胞,G418 筛选后获得阳性克隆细胞进行扩大培养;用Western 杂交的方法检测了基因靶细胞目的基因的表达;取基因修饰星形胶质细胞培养液上清培养TrkB-PC12 细胞。结果:1.RT-PCR 扩增出BDNF 片段,并连接在真核表达载体PCI-neo上,测序鉴定结果证明重组真核表达质粒PCI-neo/BDNF 构建成功。2.经G418 筛选后,转染BDNF 基因修饰星形胶质细胞呈G418 抗性;3.G418抗性的基因靶细胞培养上清Western 杂交显示有相应分子量大小的蛋白条带出现。4.转染了BDNF 基因条件培养液上清培养的TrkB-PC12 细胞,数量增多,突起明显变长。以上结果表明星形胶质细胞可直接作为基因靶细胞能有效表达和分泌有生物学活性的BDNF。
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