MIP-2在棘阿米巴性角膜炎中的表达

论文摘要

目的:建立有效的棘阿米巴角膜炎动物模型,检测棘阿米巴角膜炎中巨噬细胞炎症蛋白-2（MIP-2）的表达并探讨MIP-2在棘阿米巴角膜炎发病机制中的作用,观察干扰MIP-2对棘阿米巴角膜炎的影响。方法:1、健康加卡利亚仓鼠80只随机分为4组,每组20只。刮除仓鼠右眼角膜中央区50%的上皮,对照组覆盖无菌角膜接触镜并滴入PBS液,接触镜组覆盖有阿米巴黏附的接触镜并滴入PBS液,悬液组覆盖无菌角膜接触镜并滴入阿米巴悬液,混合组覆盖有阿米巴黏附的接触镜并滴入阿米巴悬液,在模型建立48、72小时后进行研究观察。2、健康加卡利亚仓鼠80只随机分为4组,每组20只。空白对照组不予任何处理;条件对照组刮除仓鼠右眼角膜中央区50%的上皮,覆盖无菌角膜接触镜并滴入PBS液;实验一、二组刮除右眼上皮后覆盖有阿米巴黏附的接触镜并滴入阿米巴悬液。分别于接种后1d、2d、3d、5d、7d用半定量逆转录聚合酶链反应方法（RT-PCR）检测各组中MIP-2的表达（空白对照组、条件对照组和实验一组取右眼角膜,实验二组取左眼角膜）,并对不同时间点角膜组织行HE染色及光镜观察。3、健康加卡利亚仓鼠80只随机分为4组,每组20只。刮除所有仓鼠右眼角膜中央区50%的上皮,覆盖有阿米巴黏附的接触镜并滴入阿米巴悬液。空白对照组不予任何处理;条件对照组在模型制成48小时角膜内注射PBS液;实验一组注射TNF-α;实验二组注射rMIP-2。分别于接种后3d、5d、7d、12d、18d用半定量逆转录聚合酶链反应方法检测各组中MIP-2的表达,并对不同时间点角膜组织行HE染色及光镜观察。结果:1、混合组方法能成功地建立稳定的加卡利亚仓鼠棘阿米巴角膜炎动物模型,并经角膜刮片用10%氢氧化钾封片镜检、角膜组织原虫培养和病理切片染色检查证实。2、空白对照组、条件对照组和实验二组各个观测点中均未检测到MIP-2的表达,HE染色也未发现有炎症细胞浸润。实验一组在接种阿米巴1天后即出现MIP-2的阳性表达,随时间推移表达量逐渐升高,至5天时表达最强,随后表达水平下降,但至接种后7d仍呈阳性表达。同时,光镜下观察到5个观测点均有中性粒细胞和淋巴细胞浸润,以2、3、5d为著。3、两实验组与空白对照组相比MIP-2的相对表达量有统计学意义（P＜0.05）,光镜下3、5d两个观测点可以见到密度高于空白对照组的中性粒细胞浸润。两实验组全部观测点的总愈合率分别为55%和45%,高于空白对照组的15%;两个后期观察点12、18d的总愈合率分别为100%和87.5%,也高于空白对照组的37.5%。结论:1、在去上皮的加卡利亚仓鼠角膜上覆盖与棘阿米巴原虫共同培养24小时后的减张角膜接触镜,并滴加一定量阿米巴悬液的方法,可以成功建立棘阿米巴角膜炎的动物模型,建模成功率高、病程稳定。模型制做后3天打开睑裂所得模型,虽在统计学上与2天后打开睑裂得到的模型无显著差异,但成功率略高。此方法可重复性高且模型符合该病自然病程,模型可应用于棘阿米巴角膜炎的发病机理或药物实验等研究中。2、成功的棘阿米巴角膜炎模型组第一天即发现中性粒细胞和淋巴细胞浸润,其后炎症细胞随时间推移逐渐增多,但在第七天明显下降,这一演变过程与MIP-2表达量的演变过程相符合。这表明MIP-2作为趋化因子参与了棘阿米巴角膜炎的免疫防御行为,发挥了其在自然免疫中针对中性粒细胞的特异性趋化作用。3、TNF-α可以在棘阿米巴角膜炎的发病过程中诱导MIP-2基因表达上调,高于正常表达量的MIP-2可以特异性趋化高于正常水平的中性粒细胞参与炎症反应,并能够在不严重加剧角膜破坏的情况下,加速棘阿米巴角膜炎的愈合过程。

论文目录

• 一、中文摘要
• 二、英文摘要
• 三、引言
• 四、第一部分:加卡利亚仓鼠棘阿米巴角膜炎动物模型的建立
• 1、实验材料
• 2、实验方法
• 3、结果
• 4、讨论
• 五、第二部分:检测棘阿米巴角膜炎中巨噬细胞炎症蛋白-2（MIP-2）的表达
• 1、实验材料
• 2、实验方法
• 3、结果
• 4、讨论
• 六、第三部分:干扰MIP-2对棘阿米巴角膜炎的影响
• 1、实验材料
• 2、实验方法
• 3、结果
• 4、讨论
• 七、结论
• 八、参考文献
• 九、附图
• 十、综述一:棘阿米巴角膜炎的动物模型
• 十一、综述二:棘阿米巴角膜炎的研究进展
• 十一、攻读学位期间的研究成果
• 十二、致谢