柔嫩艾美耳球虫rhomboid基因重组卡介苗的构建及其免疫保护性研究

论文摘要

鸡球虫病（Coccidiosis）是由艾美耳属（Eimeria）的各种球虫寄生在鸡的肠道引起的寄生性原虫病,所有日龄和品种的鸡都易感,严重影响了养殖业的发展。卡介苗（BCG）集佐剂与抗原于一身,是表达外源基因的理想活菌疫苗载体。为探讨重组卡介苗（rBCG）对鸡球虫感染的免疫保护作用,本研究首先构建了E.tenella rhomboid基因穿梭表达载体pMV261-Rho和整合表达载体pMV361-Rho,并在BCG内进行了rhomboid基因的诱导表达和免疫原性分析;然后将两种rBCG疫苗通过不同途径免疫雏鸡,观察其对动物免疫保护效果;在此基础上构建EGFP标记的rBCG,对Rhomboid蛋白在鸡体内各组织器官中的分布及稳定性和消长规律进行了研究;此外还将rhomboid基因与鸡IL-2基因（ChIL-2）联合构建rBCG,观察抗球虫效果。结果表明在鸡肝、脾、肺、肾、盲肠各组织器官均检测到rhomboid基因表达,雏鸡免疫14天后基因表达量达到最高,随后开始下降,至28天后消失;动物免疫保护性实验表明rBCG疫苗对E.tenella卵囊的攻击具有一定的免疫保护作用,诱导产生细胞免疫和体液免疫反应,且以滴鼻方式免疫效果最佳,抗球虫指数为174.6;将rhomboid基因与ChIL-2基因联合在卡介苗中表达,结果显示IL-2具有明显增强Rhomboid蛋白的免疫保护作用,其中pMV261-Rho-IL-2滴鼻免疫组保护效果最为明显,抗球虫指数ACI达到180以上,已达到临床使用的要求。本研究为球虫病的预防奠定了基础。

论文目录

• 内容提要
• 前言
• 第一篇 文献综述
• 第1章 寄生虫重组卡介苗的研究
• 1.1 重组卡介苗的特点
• 1.2 重组卡介苗的构建
• 1.3 重组卡介苗抗寄生虫感染
• 1.4 重组卡介苗的应用
• 第2章 鸡球虫病免疫预防及现状
• 2.1 球虫病的流行与危害
• 2.2 球虫疫苗研究现状
• 2.3 球虫病免疫机制的研究
• 2.4 展望
• 第二篇 研究内容
• 第1章 重组质粒pMV261-Rho和pMV361-Rho的构建及在卡介苗中的表达
• 1.1 材料和方法
• 1.2 结果
• 1.3 讨论
• 1.4 小结
• 第2章 重组卡介苗pMV261-Rho和pMV361-Rho对鸡柔嫩艾美耳球虫的免疫保护性实验
• 2.1 材料和方法
• 2.2 结果
• 2.3 讨论
• 2.4 小结
• 第3章 EGFP标记重组质粒pMV361-Rho-EGFP的构建及在鸡体内分布研究
• 3.1 材料和方法
• 3.2 结果
• 3.3 讨论
• 3.4 小结
• 第4章 重组质粒pMV261-Rho-IL-2 和pMV361-Rho-IL-2 的构建及在卡介苗中的表达
• 4.1 材料和方法
• 4.2 结果
• 4.3 讨论
• 4.4 小结
• 第5章 重组卡介苗pMV261-Rho-IL-2 和pMV361-Rho-IL-2 对鸡柔嫩艾美耳球虫的免疫保护性实验
• 5.1 材料和方法
• 5.2 结果
• 5.3 讨论
• 5.4 小结
• 结论
• 参考文献
• 附录 pMV261 和 pMV361 载体图谱
• 攻博期间发表的学术论文及其他成果
• 致谢
• 中文摘要
• Abstract
• 导师简介
• 作者简介