猪苓液体发酵及其多糖活性的研究

论文摘要

目的:对猪苓进行液体发酵研究,确定猪苓液体发酵的最适发酵培养基和最适培养条件;从发酵液中提取和分离猪苓多糖,并对猪苓胞外多糖进行纯化、体外抗氧化活性研究。方法:（1）应用PDA培养基进行试管斜面培养,对7株来源不同的猪苓菌株进行活化、复壮;（2）观察记录不同试管斜面培养基菌龄对发酵适应期和对数生长期的影响;测定发酵液的pH值、还原糖含量和菌丝体量,并绘制猪苓液体发酵生长曲线;（3）对温度、转速、接种量、装液量、碳源种类、氮源种类、碳源浓度、氮源浓度分别进行单因素分析,对常量元素和微量元素分别进行L423和L934正交试验分析,优化猪苓液体发酵培养基和培养条件;（4）对猪苓菌丝体超声提取条件进行优化;采用水提醇沉方法分别对猪苓菌丝体多糖和子实体多糖提取率进行比较;采用水提醇沉方法分别提取胞外水溶性多糖、胞内水溶性多糖和胞内碱溶性多糖;并用苯酚-硫酸法测定多糖含量;（5）进行多糖基本理化性质的检验,并通过芬顿（Fenton）反应、邻苯三酚自氧化法、抑制H2O2诱导红细胞氧化溶血、抑制肝组织脂质过氧化等方法,测定猪苓多糖体外抗氧化活性。结果:（1）7株猪苓菌种都活化、复壮良好;其中10号菌株成活率高、生长迅速,确定为下阶段试验菌株。（2）确定了25日龄为最适固体斜面培养基菌龄,并绘制出了猪苓液体发酵生长曲线。（3）单因素试验结果表明,猪苓发酵的最适培养条件为:温度26℃、转速130r/min、接种量10%、装液量100mL/250mL;碳源为马铃薯淀粉,浓度4.0%,氮源酵母浸出汁,浓度2%;正交试验结果表明,常量元素MgSO4.7H2O 1.0g、KH2PO4 2.0g、CaCl2 0.1g;微量元素ZnSO4 1.5mg、MnSO4 1.5mg、FeSO4 0.5mg、Vb1 2.0mg。（4）猪苓菌丝体最佳超声提取条件为超声频率16kHz、液固比为20、破碎时间为30min;猪苓菌丝体多糖和子实体多糖提取率分别为3.9%、1.7%;猪苓胞外水溶性多糖、胞内水溶性多糖、胞内碱溶性多糖提取率分别为6.3mg/mL、0.8mg/mL、1.7mg/mL。（5）基本理化性质鉴定表明,所提猪苓多糖具有糖的基本性质。体外抗氧化试验表明,猪苓胞外多糖具有较好的抗氧化作用。在多糖浓度为8.0mg/mL时,其对羟自由基清除率达60.3%;在多糖浓度为6.0mg/mL时,其超氧阴离子自由基清除率为49.8%;当多糖浓度为3.0mg/mL时,对H2O2诱导的小鼠红细胞氧化溶血的抑制率可达35.5%;当浓度为4.0mg/mL时,对脂质过氧化抑制率达到56.8%。结论:优化了猪苓液体发酵的最适发酵培养基和最适培养条件;提取出猪苓胞外多糖,并具有一定的体外抗氧化功能。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 前言
• 1 猪苓研究的概述
• 1.1 概述
• 1.2 猪苓的形态特征
• 1.3 猪苓的生长习性
• 1.4 猪苓的生物学特性与培养
• 1.5 猪苓的药材性状、主要成分、性味功效
• 1.6 发展前景
• 2 液体发酵在药用真菌中的运用
• 2.1 真菌液体发酵概述
• 2.2 液体发酵的工艺和特点
• 2.3 液体发酵的优点
• 2.4 真菌液体发酵的应用举例
• 3 多糖研究进展
• 3.1 多糖的提取、纯化和结构分析
• 3.2 多糖的生物活性
• 4 本论文的研究意义和内容
• 第一章 猪苓菌株的筛选
• 1 材料
• 1.1 试验材料
• 1.2 试验试剂
• 1.3 试验仪器
• 2 方法
• 2.1 无菌操作室的消毒
• 2.2 马铃薯葡萄糖琼脂（PDA）培养基的制备
• 2.3 猪苓菌株的复壮
• 2.4 猪苓菌种的筛选
• 3 结果
• 3.1 猪苓菌株的复壮结果
• 3.2 菌株筛选观察记录
• 4 讨论
• 4.1 菌种衰退的概念
• 4.2 菌种衰退的原因
• 4.3 防止菌种衰退的措施
• 4.4 菌种的复壮
• 5 本章小结
• 第二章 猪苓的液体发酵代谢特性的研究
• 1 材料
• 1.1 供试菌种
• 1.2 试验试剂
• 1.3 试验仪器
• 2 方法
• 2.1 液体发酵培养基配制
• 2.2 不同日龄猪苓菌株对菌丝体液体发酵的影响
• 2.3 猪苓菌丝体液体发酵生长曲线试验
• 3 结果与分析
• 3.1 不同日龄猪苓菌株对菌丝体液体发酵的影响结果
• 3.2 猪苓菌丝体液体发酵生长曲线试验结果
• 4 讨论
• 5 本章小结
• 第三章 猪苓液体发酵条件的优化
• 1 材料
• 1.1 发酵基本培养基
• 1.2 试验试剂
• 1.3 试验仪器
• 2 方法
• 2.1 液体发酵种子的培养
• 2.2 猪苓菌丝体含量的测定
• 2.3 猪苓液体发酵单因素分析
• 2.4 猪苓液体发酵正交试验分析
• 3 结果与分析
• 3.1 猪苓液体发酵单因素分析
• 3.2 猪苓液体发酵正交试验分析
• 4 讨论
• 5 本章小结
• 第四章 猪苓多糖的提取及其条件优化
• 1 材料
• 1.1 试验材料
• 1.2 试验试剂
• 1.3 试验仪器
• 2 方法
• 2.1 猪苓提取单因素分析
• 2.2 猪苓菌丝体多糖和子实体多糖得率比较
• 2.3 猪苓发酵液中各种多糖得率的比较
• 3 结果与分析
• 3.1 猪苓提取单因素分析
• 3.2 猪苓菌丝体多糖与猪苓子实体多糖得率比较
• 3.3 猪苓发酵液中各种多糖得率的比较
• 4 讨论
• 5 本章小结
• 第五章 猪苓多糖基本理化性质和体外抗氧化活性的研究
• 1 试验材料
• 1.1 试验动物
• 1.2 试验试剂
• 1.3 试验仪器
• 2 试验方法
• 2.1 猪苓多糖理化性质的初步鉴定
• 2.2 猪苓多糖的体外抗氧化活性研究
• 3 结果与分析
• 3.1 猪苓多糖理化性质的初步鉴定
• 3.2 猪苓多糖的体外抗氧化活性研究
• 4 讨论
• 5 本章小结
• 本研究的创新点
• 有待进一步研究的问题
• 参考文献
• 缩略词表
• 致谢