论文摘要
目的吗啡依赖和戒断可对中枢神经系统（CNS）造成损害。牛磺酸（Tau）具有抗氧化作用和细胞保护作用,对脑功能的维持起重要作用。锌（Zn）是公认的脑功能保护剂,并已证实吗啡可以影响机体内Zn的生理平衡,推测牛磺酸锌（TZC）对吗啡成瘾所导致的CNS损害有一定的保护作用。本实验通过观测补充TZC对吗啡依赖小鼠戒断症状、皮层和海马结构NOS活力、nNOS蛋白表达及MT1、ZnT1 mRNA表达的影响,研究TZC对吗啡依赖小鼠戒断症状的影响、吗啡依赖和戒断损害CNS神经元的机理及TZC的保护作用。方法成年健康昆明系雄性小鼠（体重20±2.0g）60只,随机分为4组（n=15）:对照组、吗啡依赖组、单纯戒断组（以上三组均饮用单蒸水,普通饲料）和TZC戒断组（饮0.34g/L TZC水,普通饲料）。喂养30d时,剂量递增法皮下注射吗啡建立吗啡依赖模型。单纯戒断组和TZC戒断组腹腔注射盐酸纳洛酮4.5mg/kg激发戒断症状,吗啡依赖组腹腔注射等量的生理盐水。对照组小鼠处理步骤同其它三组,仅注射等量的生理盐水。根据小鼠戒断反应中出现的跳跃次数、体重下降等指标评定戒断反应的强度。小鼠腹腔注射盐酸纳洛酮或生理盐水后1h,用NADPH-d组织化学、ABC免疫组织化学和RT-PCR方法测定脑组织NOS的活性、nNOS蛋白以及MT1、ZnT1基因表达水平。结果1.纳洛酮激发戒断症状结果吗啡依赖小鼠纳洛酮激发戒断症状非常明显。与单纯戒断组相比,TZC戒断组动物跳跃次数、“湿狗”样抖动次数、体重下降值减少,差异有显著性（P＜0.05）。对照组和吗啡依赖组没有观察到相应症状或很轻微。2.NADPH-d组织化学和nNOS免疫组织化学结果吗啡依赖组小鼠与对照组相比,海马CA1区和DG的NADPH-d、nNOS阳性神经元数量减少,差异有显著性（P＜0.05）;单纯戒断组小鼠与对照组和吗啡依赖组相比,皮层和海马结构CA1、CA3及DG的NADPH-d、nNOS阳性神经元数量均减少,差异有显著性（P＜0.05）;TZC戒断组小鼠与单纯戒断组相比,皮层和海马结构CA1及DG的NADPH-d、nNOS阳性神经元数量增多,差异有显著性（P＜0.05）。3.RT-PCR结果（1）实验各组MT1 mRNA表达结果:吗啡依赖组小鼠皮层及海马MT1产物电泳条带相对较强,产量较高,其光密度值较对照组升高（P＜0.05）,同时较单纯戒断组和TZC戒断组也升高,差异有显著性（P＜0.05）;单纯戒断组电泳条带光密度值较对照组升高（P＜0.05）,但低于TZC戒断组（P＜0.05）。（2）实验各组ZnT1 mRNA表达结果:在皮层,吗啡依赖组小鼠ZnT1 mRNA相对含量与其它三组相比升高,差异有显著性（P＜0.05）。单纯戒断组和TZC戒断组ZnT1 mRNA相对含量与对照组相比升高,差异有显著性（P＜0.05）,单纯戒断组与TZC戒断组之间比较,无显著性差异（P＞0.05）;在海马,单纯戒断组和TZC戒断组小鼠ZnT1产物电泳条带最强,产量最高,其光密度值与其它两组相比升高,差异有显著性（P＜0.05）。而单纯戒断组和TZC戒断组之间以及对照组和吗啡依赖组之间比较,均无显著性差异（P＞0.05）。结论TZC能够减轻吗啡依赖小鼠纳洛酮诱导的戒断症状,且具有拮抗纳洛酮戒断对皮层和海马结构神经元损害的作用,其机制可能与升高NOS活性和nNOS蛋白表达及增加MT基因表达有关,与ZnT基因表达之间的关系尚需进一步研究。