中药糖耐康干预KKAy小鼠胰岛素抵抗信号转导的作用机制研究

论文摘要

目的:观察中药复方糖耐康颗粒对自发性2型糖尿病KKAy小鼠和3T3-L1脂肪细胞的胰岛素抵抗及胰岛素信号转导途径的影响及作用机理。方法:动物实验中,将SPF级KKAy小鼠40只按血糖值随机分为模型组、糖耐康高剂量组、糖耐康低剂量组、吡咯列酮组,并选C57b1/6J小鼠为正常对照组,连续灌喂给药60天。每周测量随机血糖,60d后测定空腹血糖（FPG）、空腹胰岛素（Fins）以计算胰岛素敏感指数（ISI）、总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）,游离脂肪酸（FFA）及肿瘤坏死因子-a（TNF-a）,并对胰岛进行HE染色。实验结束后,用实时定量RT-PCR法测定小鼠骨骼肌和脂肪组织中P13-K及GluT4的mRNA的表达,免疫印迹杂交法（Weatern-blot）检测糖原合成激酶3（GSK3β）及蛋白激酶B（PKB/Akt 1αSer473）的蛋白表达及磷酸化水平。细胞实验中,将3T3-L1前脂肪细胞诱导分化为成熟脂肪细胞,油红“O”染色鉴定。用胰岛素联合地塞米松造成胰岛素抵抗模型。同时制备糖耐康、罗格列酮及空白含药血清,对细胞进行分组,分为正常组（3T3-L1脂肪细胞）、模型组、空白血清组、罗格列酮含药血清组（含8%罗格列酮血清）、中药高（含12%中药血清）、中（含8%中药血清）、低（含4%中药血清）七个剂量组。作用48h。后提取蛋白和RNA以检测。用半定量RT-PCR法测定抗性3T3-L1脂肪细胞中InsR及GluT-4的mRNA的表达。免疫印迹杂交法（Westernblot）测定IRS-1、P13-Kp85、PKB/Akt1αSer473磷酸化及GSK-3β的蛋白表达含量。结果:动物实验中,糖耐康组动物一般状况、体重较模型组有一定改善,但无明显差异,中药高剂量组动物饮水量较模型组明显减少。糖耐康高剂量组的FPG、Fins、TNF-a水平较模型组显著降低（p＜0.05）,PI3-K及GluT4 mRNA表达及PKB/Akt 1αSer 473蛋白表达及磷酸化水平较模型组明显升高（p＜0.05或p＜0.01）,且糖耐康在一定程度上能够保护胰岛β细胞,延缓β细胞衰竭,对GSK3β蛋白表达、血脂及FFA有降低趋势,但无显著性差异。细胞实验中,与模型组比较,各给药组中InsR、IRS-1、PI3-Kp85及GluT-4的蛋白及基因表达量均有一定程度上调,GSK-3β的蛋白表达有一定程度的下调,且随着中药含药血清浓度升高上调/下调程度亦升高,西药血清组作用接近中药高组或中组。结论:中药复方糖耐康具有改善KKAy小鼠胰岛素抵抗状态,保护胰岛β细胞功能,防治2型糖尿病发生发展的作用。其作用可能通过以下环节实现:①恢复胰岛素信号转导途径的异常、调节靶蛋白或基因的表达及活性而达到降低FPG及Fins等指标的水平;②通过降低TNF-α含量而减少对胰岛素信号传递的干扰因素,从受体后水平改善胰岛素抵抗状态,从而改善GluT-4的转位。

论文目录

• 目录
• 中文摘要
• Abstract
• 缩略词
• 前言
• 综述一 胰岛素抵抗在2型糖尿病发病中的地位及作用
• 1 胰岛素抵抗的概念及认识历史
• 2 IR研究的重要地位
• 3 胰岛素抵抗研究的临床意义
• 3.1 胰岛素抵抗与大血管病变的关系
• 3.2 胰岛素抵抗与亚临床炎症的关系
• 4 胰岛素抵抗定义的发展
• 5 胰岛素抵抗的研究现状及进展
• 5.1 IR与信号转导
• 5.2 细胞水平及细胞因子缺陷
• 5.3 其他
• 6 结语
• 参考文献
• 综述二 中药单体抗2型糖尿病的研究进展
• 1 按中药活性成分分类
• 1.1 生物碱
• 1.2 黄酮类
• 1.3 多糖类
• 1.4 皂苷
• 1.5 萜类
• 1.6 蒽醌类成分
• 1.7 挥发油类成分
• 1.8 酶抑制剂
• 2 按中药单体抗糖尿病的作用机制分类
• 2.1 促进胰岛素分泌,增加血清胰岛素含量
• 2.2 增加胰岛素敏感性改善胰岛素抵抗
• 2.3 延缓对葡萄糖的吸收
• 2.4 影响受体后糖代谢的某些环节
• 3 问题与展望
• 参考文献
• 实验一 动物实验部分
• 材料与方法
• 1 材料
• 1.1 实验动物
• 1.2 药物
• 1.3 主要试剂
• 1.4 主要仪器
• 2 方法
• 2.1 动物分组
• 2.2 给药方法
• 2.3 取材
• 2.4 观察指标及检测方法
• 2.5 试验用主要溶液的配置
• 2.6 统计方法
• 3 结果
• 3.1 动物一般情况
• 3.2 动物饮水量情况（见表1,图1）
• 3.3 动物体重变化情况（见表2,图2）
• 3.4 糖耐康颗粒对FPG的影响（见表3,图3）
• 3.5 糖耐康颗粒对Fins水平的影响（见表4,图4）
• 3.6 糖耐康颗粒对ISI水平的影响（见表5,图）5
• 3.7 糖耐康颗粒对TNF-α水平的影响（见表6,图6）
• 3.8 糖耐康颗粒对血脂四项（TC、TG、HDL-C、LDL-C）水平的影响（见表7,图7）
• 3.9 糖耐康颗粒对PI3-K p85的mRNA表达影响
• 3.10 糖耐康颗粒对PKB/Akt1 α Ser 473蛋白磷酸化表达影响（见表9及图10）
• 3.11 糖耐康颗粒对GSK3β蛋白表达影响（见表10及图11）
• 3.12 糖耐康颗粒对GluT4的mRNA表达影响
• 3.13 糖耐康对小鼠胰腺组织的形态学影响（见图13-17）
• 3.14 小结
• 实验二 细胞实验部分
• 材料与方法
• 1 材料
• 1.1 实验试剂
• 1.2 实验仪器
• 1.3 实验药品
• 2 方法
• 2.1 细胞培养及诱导分化
• 2.2 脂肪细胞鉴定
• 2.3 3T3-L1脂肪细胞建立胰岛素抵抗模型
• 2.4 胰岛素抵抗细胞模型的药物处理
• 2.5 胰岛素受体（InsR）及葡萄糖转运子4（GluT4）基因半定量RT-PCR
• 2.6 胰岛素受体底物1（IRS-1）、磷脂酰肌醇3激酶（PI3-K p85）、蛋白激酶B（PKB/Akt1 α Ser473）及糖原合成激酶3β（GSK-3β）的蛋白表达（均用Western blot方法）
• 2.7 试验用溶液配置
• 3 结果
• 3.1 3T3-L1前脂肪细胞生长特点
• 3.2 3T3-L1脂肪细胞的鉴定（见图4-5）
• 3.3 糖耐康含药血清对胰岛素抗性3T3-L1脂肪细胞的InsR mRNA表达的影响（见图6）
• 3.4 糖耐康含药血清对胰岛素抗性3T3-L1脂肪细胞的IRS-1蛋白表达的影响（见图7）
• 3.5 糖耐康含药血清对胰岛素抗性3T3-L1脂肪细胞PI3-K p85亚基蛋白表达的影响（见图8）
• 3.6 糖耐康含药血清对胰岛素抗性3T3-L1脂肪细胞GSK-3β蛋白表达的影响（见图9）
• 3.7 糖耐康含药血清对胰岛素抗性3T3-L1脂肪细胞GluT-4 mRNA表达的影响（见图10）
• 3.8 小结
• 讨论
• 1 胰岛素抵抗研究的新动向
• 2 本实验对动物模型的要求
• 3 阳性对照药的选择
• 4 从中医角度阐释2型糖尿病胰岛素抵抗的成因及机理
• 5 糖耐康颗粒处方组成及方义分析
• 6 指标选择依据
• 问题与展望
• 1 动物实验
• 2 细胞实验
• 研究创新点
• 参考文献
• 致谢
• 个人简历