论文摘要
目的通过体外细胞试验,观察在枯否细胞（Kupffer Cells, KCs）中活化的肝X受体（Liver X receptors, LXR）在脂多糖（Lipopolysaccharide, LPS）诱导的炎症反应中,对Toll样受体4（Toll-like receptor-4, TLR4）信号通路中白细胞介素-1受体相关激酶-4（Interleukin-1 receptor associated kinase-4, IRAK-4）和核因子NF-κB（Nuclear factor-kappaB, NF-κB）的影响,探讨LXR激动剂对TLR4信号通路的影响及活化的LXR负性调控炎症反应的相关机制。方法雄性KM小鼠,用胶原酶原位灌注法分离和培养肝脏Kupffer细胞,获得的细胞随机分为○1正常对照组、○2 LPS处理组、○3 LXR人工合成激动剂T0901317处理组和○4 LPS+T0901317共同处理组。正常对照组未给任何处理;LPS处理组用含终浓度为1μg/ml LPS的RPMI 1640完全培养基培养6h;T0901317处理组用含终浓度为5μg/ml T0901317的RPMI 1640完全培养基培养24h;LPS+T0901317共同处理组先用含终浓度为5μg/ml T0901317的RPMI 1640完全培养基培养24h,再用含终浓度为1μg/ml LPS的RPMI 1640完全培养基培养6h。所有组均培养至30h。实时-聚合酶链式反应检测各组细胞LXR、IRAK-4和NF-κB的mRNA表达水平;免疫细胞化学和蛋白免疫印迹法检测LXR、IRAK-4和NF-κB的蛋白质表达水平;蛋白免疫印迹法检测IRAK-4磷酸化活性水平,凝胶电泳迁移率法检测NF-κB活性水平;酶联免疫吸附法检测各组细胞培养液TNF-α和IL-1β含量。结果○1 LXR mRNA和蛋白表达水平在LXR激动剂T0901317处理组表达最高（分别为0.9912±0.0098和1.740±0.034）,在LPS处理组最低（分别为0.2722±0.0038和0.534±0.014）,而联合处理组表达居前两组之间（分别为0.7963±0.0075和1.224±0.027）,各组之间蛋白和mRNA表达有明显差异（p<0.05）。○2 IRAK-4 mRNA的水平在LPS处理组最高（3.9238±0.0594）,LXR激动剂处理组（0.8756±0.0093）最低,这两组与其余组差异显著（p<0.05）,在正常对照组（1.7853±0.0267）和联合处理组（2.0132±0.0406）表达都很低,这两组之间表达无显著差异（p>0.05）。IRAK-4蛋白表达水平在LPS处理组最高（0.710±0.018）,在LXR激动剂处理组最低（0.102±0.004）,这两组与其余组差异显著（p<0.05）,而正常对照组（0.271±0.008）和联合处理组（0.257±0.008）的蛋白表达居于前两组之间且他们两组表达无明显差异（p>0.05）,但与LPS处理组和LXR激动剂T0901317处理组有显著差异（p<0.05）。○3 NF-κB的mRNA水平在LPS处理组最高（25.2142±0.3501）,联合处理组较低（11.0173±0.2508）,两者差异显著（p<0.05）,在正常对照组（9.6881±0.1272）和LXR激动剂T0901317处理组（8.9615±0.1723）表达都很低,这三组之间表达无显著差异（p>0.05）。NF-κB的蛋白表达水平在LPS处理组最高（0.693±0.017）,与其余三组差异显著（p<0.05）,而其余三组中蛋白表达较低且他们之间无明显差异（p>0.05）。○4 IRAK-4的磷酸化活性形式在正常对照组（0.242±0.008）和LXR激动剂T0901317处理组（0.201±0.007）量很低,两者无明显差异（p>0.05）,在LPS处理组（0.893±0.019）和联合处理组（0.865±0.018）量很高,这两组也无明显差异（p>0.05）,但与正常对照组和LXR激动剂T0901317处理组差异都很显著（p>0.05）。NF-κB的相对活性度在正常对照组（24%±1%）和LXR激动剂处理组（28%±1%）很低,这两组之间无明显差异（p>0.05）,在联合处理组活性度（75%±2%）高于前两组,且于前两组有明显差异（p<0.05）,在LPS处理组活性度最高（100%±0%）,与其余各组有显著差异（p<0.05）。○5细胞培养上清液中TNF-α（15.45±0.59μg/ml）和IL-1β（20.23±0.64μg/ml）的水平在LPS处理组最高,与其余各组有明显差异（p<0.05）,而正常对照组,LXR激动剂T0901317处理组和联合处理组水平较低,且他们三组之间没有明显差别（p>0.05）。结论以上研究表明LXR激动剂能有效的上调LXR基因和蛋白水平,同时抑制TLR4信号通路中IRAK-4的mRNA水平和蛋白表达水平。但是对于IRAK-4的磷酸化却没有明显影响,对NF-κB的mRNA和蛋白表达水平都有抑制作用,并且能抑制NF-κB的转位活化,这可能是LXR激动剂发挥抗炎症作用的可能机制之一。
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- [1].大鼠肝纤维化进程中原代Kupffer细胞吞噬能力及表型变化特征研究[J]. 免疫学杂志 2019(03)
- [2].Kupffer细胞在非酒精性脂肪肝病中的作用[J]. 生命的化学 2019(03)
- [3].Inflammation-induced CD69~+ Kupffer cell feedback inhibits T cell proliferation via membrane-bound TGF-β1[J]. Science China(Life Sciences) 2016(12)
- [4].Kupffer细胞在肝移植缺血再灌注损伤中的作用[J]. 中国普外基础与临床杂志 2020(10)
- [5].大鼠Kupffer细胞分离、培养及永生化实现[J]. 大众科技 2017(12)
- [6].Kupffer细胞在乙型和丙型病毒性肝炎发病机制中的作用[J]. 中国现代普通外科进展 2016(05)
- [7].Kupffer细胞在非酒精性脂肪性肝病中的作用[J]. 细胞与分子免疫学杂志 2015(03)
- [8].Alcoholic hepatitis: The pivotal role of Kupffer cells[J]. World Journal of Gastrointestinal Pathophysiology 2015(04)
- [9].Kupffer细胞与肝缺血再灌注损伤[J]. 胃肠病学和肝病学杂志 2013(09)
- [10].Ron receptor-dependent gene regulation of Kupffer cells during endotoxemia[J]. Hepatobiliary & Pancreatic Diseases International 2014(03)
- [11].Hyaluronic acid fragments evoke Kupffer cells via TLR4 signaling pathway[J]. Science in China(Series C:Life Sciences) 2009(02)
- [12].Laser capture microdissection and genetic analysis of carbon-labeled Kupffer cells[J]. World Journal of Gastroenterology 2009(14)
- [13].Prokineticin 2/Bv8 is expressed in Kupffer cells in liver and is down regulated in human hepatocellular carcinoma[J]. World Journal of Gastroenterology 2008(08)
- [14].脂多糖诱导Kupffer细胞激活、焦亡及耐受机制研究进展[J]. 重庆医学 2019(15)
- [15].脂多糖对肝脏Kupffer细胞增殖和分泌功能及超微结构的影响[J]. 解放军医药杂志 2017(10)
- [16].大鼠肝Kupffer细胞分离方法改进[J]. 生物医学工程与临床 2015(05)
- [17].T细胞免疫球蛋白及黏蛋白家族-3对干扰素-γ活化的小鼠肝Kupffer细胞分泌炎性细胞因子的调节作用及机制[J]. 中华实验和临床感染病杂志(电子版) 2015(05)
- [18].白术多糖对小鼠Kupffer细胞免疫功能的激活作用[J]. 西北药学杂志 2013(06)
- [19].改进的大鼠原代Kupffer细胞分离与鉴定方法[J]. 临床与实验病理学杂志 2012(04)
- [20].Effects of Different Therapeutic Methods and Typical Recipes of Chinese Medicine on Activation of c-Jun N-terminal Kinase in Kupffer Cells of Rats with Fatty Liver Disease[J]. Chinese Journal of Integrative Medicine 2012(10)
- [21].Kupffer cells contribute to concanavalin A-induced hepatic injury through a Th1 but not Th17 type response-dependent pathway in mice[J]. Hepatobiliary & Pancreatic Diseases International 2011(02)
- [22].Heme oxygenase-1 protects donor livers from ischemia/reperfusion injury:The role of Kupffer cells[J]. World Journal of Gastroenterology 2010(10)
- [23].大鼠Kupffer细胞分离方法的优化[J]. 山西中医学院学报 2018(04)
- [24].牛磺熊去氧胆酸抑制Kupffer细胞减轻大鼠肝移植后缺血再灌注损伤[J]. 第三军医大学学报 2018(18)
- [25].M2-like Kupffer cells in fibrotic liver may protect against acute insult[J]. World Journal of Gastroenterology 2017(20)
- [26].Kupffer细胞在梗阻性黄疸致肝损害作用中的研究进展[J]. 腹部外科 2016(05)
- [27].Kupffer细胞与肝纤维化关系的研究进展[J]. 宜春学院学报 2015(03)
- [28].Kupffer细胞在非酒精性脂肪性肝病形成中的作用[J]. 中国中医药现代远程教育 2010(09)
- [29].乙醛及其刺激的Kupffer细胞对肝星状细胞活化的影响[J]. 现代医学 2009(01)
- [30].Role of liver X receptors alpha agonist on expressions of LPS-induced inflammatory response associated factor IRAK-4 and NF-kappaB in Kupffer cells[J]. Journal of Medical Colleges of PLA 2008(02)
标签：肝受体论文; 枯否细胞论文; 白介素受体相关激酶论文; 核因子论文; 样受体论文;