肺癌中IGF-II蛋白表达与HPV感染的相关性研究及Igf2基因的印迹状态分析

论文摘要

目的:1.探讨HPV感染在肺癌发生中的病因学意义,并分析HPV感染与临床病理特征的关系;2.研究IGF-II蛋白过表达与肺癌发生、发展的相关性,及其与临床病理特征的关系;3.初步分析肺癌中HPV感染与IGF-II蛋白表达的相关性;4.检测肺癌中Igf2基因的印迹状态,并分析其印迹缺失的意义。方法:1.免疫组化SP法检测高危广谱型HPV-E6/E7原癌蛋白与IGF-II蛋白分别在68例肺癌和12例肺良性病变组织中的表达情况;2.分别采用PCR-RFLP和RT-PCR-RFLP方法检测64例肺癌和24例肺良性病变中Igf2基因的印迹状态。结果:1.68例肺癌和12例肺良性病变中HPV感染和IGF-II蛋白表达的结果采用免疫组化SP法检测高危广谱型HPV E6/E7原癌蛋白,并参照本实验组已有的PCR方法对HPV 16/18亚型的检测,以两种检测结果均为阳性定义为本实验的HPV感染阳性,从而提高高危型HPV 16/18检测的准确性。其结果显示,肺癌组织中HPV阳性检出率为44.1%（30/68）;而肺良性病变组织中,HPV阳性检出率只有8.3%（1/12）,二者差异具有统计学意义（P <0.05）。肺癌组织中IGF-II蛋白表达程度较强,其阴性、阳性和强阳性表达率分别为10.3%（7/68）、36.8%（25/68）和52.9%（36/68）;肺良性病变组织中IGF-II蛋白阴性、阳性和强阳性表达率依次为75%（9/12）、16.7%（2/12）和8.3%（1/12）,差异具有统计学意义（P <0.05）。2.68例肺癌中HPV阳性组和HPV阴性组的IGF-II蛋白表达情况HPV阳性组中IGF-II蛋白表达程度较高,其阴性、阳性和强阳性表达率分别为3.3%（1/30）、30.0%（9/30）和66.7%（20/30）;而HPV阴性组中IGF-II蛋白表达率依次为15.8%（6/38）、42.1%（16/38）和42.1%（16/38）,二者有统计学差异（P <0.05）。3.68例肺癌中HPV感染、IGF-II蛋白表达与临床病理参数的关系HPV感染和IGF-II蛋白表达均与肿瘤分化程度具有统计学差异。HPV感染率在低分化组中为64.3%（18/28）,明显高于在中分化组中的33.3%（9/27）和高分化组中的23.1%（3/13）,三组间具有统计学差异（P<0.05）。IGF-II蛋白的阴性、阳性和强阳性表达率在低分化组中依次为10.7%（3/28）、17.9%（5/28）和71.4%（20/28）;在中分化组中依次为7.4%（2/27）、40.7%（11/27）和51.9%（14/27）;在高分化组中依次为15.4%（2/13）、69.2%（9/13）和15.4%（2/13）,并以低分化组中IGF-II蛋白表达程度最强,三组差异具有统计学意义（P <0.05）。IGF-II蛋白在淋巴结转移组中的强阳性表达率为64.3%（27/42）;在非淋巴结转移组中的强阳性表达率为34.6%（9/26）,差异具有统计学意义（P <0.05）,提示IGF-II蛋白的高表达与淋巴结转移相关。IGF-II蛋白的阴性、阳性和强阳性表达率在临床I期中为12.5%（2/16）、62.5%（10/16）和25.0%（4/16）;在临床II期中则为13.3%（2/15）、46.7%（7/15）和40.0%（6/15）;而以IIIIV期中IGF-II蛋白表达程度最强,其阴性、阳性和强阳性表达率为8.1%（3/37）、21.6%（8/37）和70.3%（26/37）,经统计学分析,IGF-II蛋白表达与临床分期具有相关性（P <0.05）。4.RFLP法鉴定印迹基因Igf2的印迹状态采用PCR-RFLP方法对Igf2基因第9外显子（E9）Apa I酶切位点的多态性进行鉴定,筛选出具有转录多态性位点的杂合子。结果显示,肺癌组中杂合子占48.4%（31/64）,肺良性病变组中杂合子占37.5%（9/24）。继续采用RT-PCR-RFLP方法检测并分析Igf2杂合子的基因印迹状态。结果显示,肺癌杂合子中77.4%（24/31）出现了印迹缺失（LOI,双等位基因表达）,22.6%（7/31）为正常印迹（单等位基因表达）者;肺良性病变杂合子中66.7%（6/9）发生了LOI,33.3%（3/9）存在正常印迹。二者间差异无统计学意义（χ2=0.430,P =0.512）。在31例肺癌杂合子的配对组织中,肺癌组织有77.4%（24/31）发生了LOI;癌旁2cm肺组织中61.3%（19/31）发生了LOI;而离肿块最远端肺组织只有29.0%（9/31）出现LOI,三组间Igf2基因的LOI具有统计学差异（P <0.05）。并且,肺癌组织和癌旁2cm组织分别与离肿块最远端肺组织之间的LOI存在统计学差异（P <0.05）,而肺癌组织和癌旁2cm组织间差异并无统计学意义（χ2=1.897,P =0.168）。结论:1.肺癌中高危型HPV16/18感染率显著高于良性对照组,并且HPV感染与肺癌分化程度相关,提示高危型HPV感染在肺癌的发生、发展中可能发挥一定的作用。2.肺癌中IGF-II蛋白的表达程度较之良性对照组明显增强,与肺癌的淋巴结转移、组织分化程度和临床分期相关。IGF-II是一个重要的促有丝分裂原,提示其过表达可能导致细胞的恶性转化,并易发生淋巴管上皮细胞增殖,促使肺癌易通过淋巴结转移,表明IGF-II在肺癌的发生、发展过程中起着重要的作用。3.肺癌中IGF-II蛋白表达与HPV感染相关,HPV-E6/E7原癌蛋白的存在可能通过使Igf2基因发生印迹缺失而导致IGF-II蛋白异常表达,从而发挥促增殖、抑凋亡作用,参与肺癌的发生、发展。4.Igf2基因的LOI在配对组织中具有统计学差异,肺癌组织、癌旁2cm肺组织中Igf2基因的LOI明显高于离肿块最远端肺组织,提示肺癌组织可能主要通过自分泌和旁分泌方式产生大量的IGF-II,参与肿瘤的生长。

论文目录

• 一、主要缩略语
• 二、中文摘要
• 三、英文摘要
• 四、正文
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 附图
• 参考文献
• 五、综述
• 参考文献
• 六、致谢