沙苑子多糖的分离纯化与理化性质研究

论文摘要

正文:沙苑子（Astragaius Compianatus R.Br）又名潼蒺藜。主要产地是陕西、河北、东北等地。具有补肝、益肾、明目、固精之功效。主治肝肾虚弱,腰膝酸痛、遗精早泄,小便频数,目暗不明等症。沙苑子用途较广,是开展综合利用的药食兼用植物资源。为了进一步开发利用沙苑子,本论文对陕西沙苑子的主要营养成分、多糖提取工艺、分离纯化、理化性质和生物活性等方面进行了较为深入的研究,取得了以下试验成果。沙苑子富含多种氨基酸,微量元素等营养物质,且含量互有不同。沙苑子水溶性部分测得14种氨基酸,其中谷氨基酸含量最高为68%,其次为天冬氨酸14%,并有赖氨酸、苏氨酸、缬氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸、异亮氨酸等7种人体必需氨基酸,这说明沙苑子具有较高的食用和药用价值。沙苑子多糖的最佳提取工艺为:热水提取法,温度65℃,加入15倍水,浸提6h,粗多糖最高得率5.06g/kg;超声波辅助提取技术,功率300W,超声时间25min,料液比1:15（W:V）,提取得率5.53g/kg,但是超声对多糖结构可能有影响;在传统Sevag法除蛋白的基础上采用Sevag法结合酶法除蛋白,大大提高了除蛋白率。采用DEAE Sepharose CL-6B离子交换柱和Sephadex G-200凝胶柱层析分离纯化沙苑子多糖,具有较好的分离效果,共得到ACRBⅠ-a、ACRBⅠ-b、ACRBⅡ-a、ACRBⅡ-b、ACRBⅢ、ACRBⅣ六种级分。其中ACRBⅠ-a量较小不对其进行研究,由SephadexG-200柱层析结果可看出,此分离过程对ACRBⅠ-b、ACRBⅡ-a、ACRBⅡ-b、ACRBⅢ的分离作用更好。本论文对ACRBⅠ-b、ACRBⅡ-a、ACRBⅡ-b、ACRBⅢ进行了深入研究。本试验采用SephadexG-200柱（1.1×100cm）层析法测定多糖的分子量,为了评价该法的精确性,我们将标准分子量葡聚糖T-70和T-40混合后上柱,在前述柱层析条件下获得了很好的分离效果。ACRBⅠ-b、ACRBⅡ-a、ACRBⅡ-b、ACRBⅢ分子量分别为67kD,75kD,68kD,63kD。本试验测定多糖的溶解性时,采用单位体积水溶解一定量多糖所用的时间来表示,而没有采用溶解度来表示,这是因为多糖溶液可能形成溶胶而不能准确地评价其溶解性。沙苑子纯多糖在120℃下进行了10h酸水解,水解完全。气相色谱分析结果表明对于沙苑子多糖,利用硫酸水解、三甲基硅醚化衍生后分析效果较好。气相色谱,红外光谱和理化特性分析表明ACRBⅠ-b、ACRBⅡ-a、ACRBⅡ-b、ACRBⅢ均为杂多糖;ACRBⅠ-b和ACRBⅡ-a主要由葡萄糖组成;ACRBⅡ-b主要由鼠李糖、阿拉伯糖、核糖和半乳糖组成;ACRBⅢ主要由甘露糖组成。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第1章 绪论
• 1 引言
• 1.1 沙苑子的植物形态及分布
• 1.2 沙苑子的化学成分
• 1.2.1 氨基酸的组成
• 1.2.2 黄酮类组成
• 1.2.3 脂肪酸含量
• 1.2.4 微量元素组成
• 1.3 沙苑子的药理作用
• 1.3.1 抗炎作用
• 1.3.2 对血液流变学的影响
• 1.3.3 对血压和心率的影响
• 1.3.4 抗毒性作用
• 1.3.5 降脂保肝作用
• 1.3.6 抑制血小板聚集作用
• 1.3.7 抗利尿作用
• 2 多糖的研究概况
• 2.1 多糖的生物活性
• 2.1.1 多糖的抗肿瘤活性
• 2.1.2 多糖的免疫调节作用
• 2.1.3 抗凝血活性
• 2.1.4 多糖抗病毒活性
• 2.1.5 降血糖、降血脂活性
• 2.1.6 抗氧化、抗衰老活性
• 2.1.7 其他活性
• 2.2 多糖生物活性的构效关系
• 2.2.1 多糖的结构
• 2.2.1.1 一级结构
• 2.2.1.2 二级结构
• 2.2.1.3 三级和四级结构
• 2.2.2 一级结构与生物活性的关系
• 2.2.2.1 主链结构与生物活性的关系
• 2.2.2.2 侧链基团与生物活性的关系
• 2.2.2.3 分支度与生物活性的关系
• 2.2.2.4 高级结构与生物活性的关系
• 2.2.3 多糖的理化性质与活性关系
• 2.2.3.1 溶解度
• 2.2.3.2 分子量
• 2.2.4 其它
• 2.3 多糖的提取分离纯化
• 2.4 多糖的化学结构分析
• 2.4.1 化学方法
• 2.4.1.1 酸水解、乙酰解和碱降解
• 2.4.1.2 过碘酸氧化反应
• 2.4.1.3 甲基化反应
• 2.4.1.4 Smith降解
• 2.4.2 物理法
• 2.4.3 生物学方法（酶法）
• 2.4.4 多糖构象分析方法
• 3 本课题研究的目的及意义
• 第二章 沙苑子中主要成分分析检测及粗多糖的提取分离
• 1 试验材料及方法
• 1.1 材料
• 1.2 主要仪器
• 1.3 检测方法
• 1.4 水溶性多糖的提取
• 1.4.1 材料、试剂及仪器
• 1.4.4.1 试验材料
• 1.4.4.2 仪器与材料
• 1.4.2 试验方法
• 1.4.2.1 沙苑子多糖提取工艺
• 1.4.2.2 操作要点
• 1.4.2.3 可溶性糖含量的测定
• 1.4.2.4 多糖得率的计算
• 1.4.2.5 水提醇提取酸沙苑子水溶性多糖的浸提条件研究
• 1.4.2.6 超声法提取沙苑子水溶性多糖的浸提条件研究
• 1.4.2.7 脱蛋白
• 1.4.2.8 脱色
• 1.4.3 试验结果与讨论
• 1.4.3.1 水提醇沉法最佳提取工艺
• 1.4.3.2 水提醇沉法最佳工艺条件的确定
• 1.4.3.3 超声提取法最佳提取工艺
• 1.4.3.4 超声提取法最佳工艺条件的确定
• 1.4.3.5 不同浸提方法得率比较
• 2 结论
• 2.1 沙苑子多糖提取试验
• 2.2 沙苑子粗多糖脱蛋白试验
• 第三章 沙苑子水溶性多糖的分离纯化及理化性质分析
• 1 试验材料、试剂及仪器
• 1.1 试验材料
• 1.2 试剂
• 1.3 仪器
• 2 试验方法
• 2.1 分离纯化
• 2.2 纯度鉴定
• 2.2.1 凝胶柱层析法
• 2.2.2 醋酸纤维薄膜电泳法
• 2.3 分子量测定
• 2.4 单糖组分分析
• 2.4.1 纸层析法
• 2.4.2 气相色谱法
• 3 试验结果与讨论
• 3.1 DEAE sepharose CL-6B柱层析分离
• 3.2 凝胶层析分离多糖组分
• 3.3 纯度鉴定
• 3.3.1 凝胶柱层析
• 3.3.2 醋酸纤维薄膜电泳法
• 3.4 分子量测定
• 3.5 ACRB Ⅰ-b、ACRB Ⅱ-a、ACRB Ⅱ-b、ACRBⅢ气相色谱分析
• 4 结论
• 参考文献
• 致谢