基质金属蛋白酶3的基因多态性与类风湿关节炎关节骨侵蚀相关性的研究

基质金属蛋白酶3的基因多态性与类风湿关节炎关节骨侵蚀相关性的研究

论文摘要

目的:了解基质金属蛋白酶3的基因启动子区单核苷酸多态性与类风湿关节炎病情及其关节骨侵蚀的相关性,是否存在类风湿关节炎关节骨侵蚀发生的易感基因。同时探讨外周血单核细胞基质金属蛋白酶3的mRNA表达水平和类风湿关节炎病情及其关节骨侵蚀的相关性。研究对象和方法:试验组RA患者281例,均为上海仁济医院和上海光华医院门诊RA患者(符合ACR87年分类标准),其中女性患者227例,男性患者54例,记录RA患者的年龄、性别、病程、肿胀关节数、压痛关节数、晨僵时间、患者对关节疼痛的自我评分、患者对病情活动性的自我评分、医师对病情活动性的评分、患者关节功能分级、ESR、WBC计数、RF、双手关节X线分期及Sharp评分。对照组151例,为镇江市第一人民医院健康体检人群,并排除OA、肿瘤等影响MMP表达的因素,记录年龄、性别,其中女性121例,男性30例。检测方法所检测的基因位点是MMP-3基因启动区-1171,5A/6A。取研究对象外周血1ml,分离、Trizol裂解白细胞,抽提DNA,使用焦磷酸盐测序法检测样本DNA序列,将上述部分外周血通过Ficoll分离出单核细胞,Trizol裂解单核细胞,抽提mRNA,通过实时定量PCR检测mRNA表达水平。数据统计采用t检验、χ2检验、Mann-Whitney U检验,取α=0.05为显著性检验标准。结果:在281例RA患者中,MMP-3三种基因型的人数分别为5A/5A 8例,5A/6A 49例,6A/6A 224例,对照组中为5A/5A 4例,5A/6A 28例,6A/6A 119例,两组间无显著性差异(χ2=0.042 p=0.97>0.05)。将RA患者按病程分为≤3年组,3年<病程≤6年组,病程>6年组。在每组中,具有6A/6A基因型的患者和不具有这种基因型的患者之间的ESR,肿胀关节数,疼痛关节数,晨僵时间,DAS28评分无显著性差异。而每组中双手关节sharp评分有显著性差异:在病程≤3年组,5A/5A+5A/6A组为4.36±5.13,6A/6A组为7.96±8.00,p=0.04<0.05;3年<病程46年组,5A/5A+5A/6A组为10.2±5.97,6A/6A组为18.05±9.25,p=0.01<0.05;在病程>6年的RA组,5A/5A+5A/6A组为56.2±27.8,6A/6A组为49.2±27.0,p=0.65>0.05,sharp评分无显著性差异。随机选取92例RA患者,和64例健康人,检测其外周血单核细胞MMP-3的mRNA表达水平,存在显著性差异(p<0.05)。RA患者MMP-3的mRNA的表达水平高于健康对照组,活动期RA患者MMP-3的mRNA的表达水平高于非活动期的患者(p<0.05)。在肋患者中,具有6A/6A基因型的患者和不具有这种基因型的患者其MMP-3的mRNA的表达水平无显著性差异(p>0.05),在具有6A/6A基因型的RA患者在病程≤6年和病程>6年时mRNA的表达水平无显著性差异(p>0.05)。结论:通过对RA患者和健康人MMP-3的基因启动子区的单个核苷酸多态性分析,发现在RA患者和健康人中基因的多态性分布频率无显著性差异,基因的多态性与RA的易感无关。在RA中,具有不同MMP-3基因型患者的ESR、晨僵时间、肿胀关节数、疼痛关节数,DAS28评分无显著性差异。而具有6A/6A基因型的患者在病程小于6年时其双手关节sharp评分高于另外两种基因型的患者,但病程超过6年后,尽管两组患者的sharp评分都处于较高水平,但无显著性差异。RA患者外周血单核细胞MMP-3的mRNA表达水平高于健康对照人群,有显著性差异,活动期RA患者外周血单核细胞MMP-3的mRNA表达水平高于非活动期的患者,有显著性差异。但在RA患者中,不同基因型的患者的mRNA表达水平无显著性差异,具有6A/6A基因型的RA患者在病程≤6年和病程>6年时,mRNA表达水平无显著性差异。

论文目录

  • 摘要
  • ABSTRACT
  • 前言
  • 第一部分
  • 材料和方法
  • 1.1 实验材料
  • 1.1.1 实验样本
  • 1.1.2 实验主要试剂
  • 1.1.3 主要仪器设备
  • 1.2 实验方法及步骤
  • 1.2.1 外周血基因组DNA抽提
  • 1.2.2 测定DNA样本的含量
  • 1.2.3 PCR反应程序
  • 1.2.4 琼脂糖凝胶电泳
  • 1.2.5 焦磷酸测序进行SNP位点直接测序
  • 1.2.6 相关临床指标的检测和计算
  • 1.2.7 双手关节X线进展的评估
  • 1.2.8 数据的统计分析
  • 结果
  • 2.1 RA患者与健康对照组年龄和性别资料比较
  • 2.2 MMP-3基因型与RA发病易感性的实验结果
  • 2.3 MMP-3基因型多态性与疾病相关指标、活动性及关节侵蚀的关系
  • 结论
  • 讨论
  • 第二部分
  • 材料和方法
  • 1.1 实验材料
  • 1.1.1 实验样本
  • 1.1.2 实验主要试剂
  • 1.1.3 实验仪器
  • 1.2 实验方法和步骤
  • 1.2.1 外周血单个核细胞RNA抽提
  • 1.2.2 测定RNA样本的含量
  • 1.2.3 逆转录反应体系
  • 1.2.4 逆转录反应条件
  • 1.2.5 Real Time PCR反应
  • 1.2.6 RA活动性的判定
  • 1.2.7 数据的统计分析
  • 结果
  • 2.1 Real Time PCR结果分析
  • 2.1.1 引物溶解曲线
  • 2.1.2 cDNA反应结果
  • 2.1.3 数据分析
  • 结论
  • 讨论
  • 参考文献
  • 致谢
  • 综述
  • 在学期间发表的论文
  • 相关论文文献

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