Livin，Survivin在肝癌细胞的表达及5-Fu对其诱导作用的实验研究

论文摘要

目的:原发性肝癌是我国常见的恶性肿瘤之一。据1995年卫生部的统计,我国肝癌年死亡率占肿瘤死亡率的第二位。且近年其发病率,复发率及死亡率有增高的趋势。而肝癌的浸润、转移及对化疗药物的耐药是常常是治疗失败以及影响患者生命的重要原因。肝癌的浸润、转移及对化疗药物的耐药受到许多特殊基因的调控,是一个多基因、多阶段的复杂过程,涉及到癌基因和抑癌基因及调节因子,而且这些机理仍未阐明。凋亡抑制蛋白家族（inhibitors of apoptosis proteins,lAPs）是一类分子水平抗凋亡的调节因子,能够抑制细胞的调亡。Livin则是最近发现的凋亡抑制蛋白。它于2000年由lin等[1]根据lAP同源序列,用含有BIR序列的EST克隆在人的胎肾cDNA库中发现并被命名为KIAP （kidney inhibitor of apoptosis protein）。Vucic等[2]发现该基因在人黑色素瘤细胞中高表达,故称ML-lAP（melanoma inhibitor of apoptosis protein）。Kasof[3]等根据同源检索发现该基因并将之命名为Livin。Survivin则是分子量最小的凋亡抑制蛋白。二者N端皆含有一杆状病毒lAP重复（baculovirus lAP repeat,BIR）。Livin的C端有一Ring结构,而Survivin无环指结构。研究表明Livin,Survivin在正常终末分发组织不表达或仅仅低表达,而在很多肿瘤组织中高表达。提示他们与肿瘤的发生,发展,转移有重要的作用。其抑制凋亡的主要作用机制为与caspase互相作用,抑制caspase的活性。而caspase激活是是凋亡推进的关键环节。本研究即检测Livin,Survivin在肝癌细胞株HepG2的表达,并检测运用化疗药物处理后肝癌细胞株HepG2中Livin,Survivin的变化,探讨Livin,Survivin在肝癌化疗耐药中的作用,为肝癌的基因治疗提供理论基础及技术支持。方法:1.培养肝癌细胞株HepG2。2.取对数生长期的肝癌细胞株,加入低浓度的5-Fu,运用PCR方法分别检测未加5-Fu,加用5-Fu 24小时,加用5-Fu 48小时Livin mRNA,Survivin mRNA的表达。3.取对数生长期的肝癌细胞株,加入低浓度的5-Fu,运用Western方法分别检测未加5-Fu,加用5-Fu 24小时,加用5-Fu 48小时Livin蛋白,Survivin蛋白的表达。结果:1.成功的培养肝癌细胞株HepG22. PCR方法证实Livin mRNA,Survivin mRNA在肝癌细胞株有表达,加用5-Fu后Livin mRNA,Survivin mRNA的表达有增加,运用Quantity-One凝胶成像分析系统分别测定并比较未加用5-Fu,加用5-Fu 24小时,加用5-Fu 48小时Livin mRNA,Survivin mRNA条带吸光度值,P<0.5,说明加用5-Fu对Livin mRNA,Survivin mRNA的表达有显著差异。3.Western方法证实Livin蛋白,Survivin蛋白在肝癌细胞株有表达,加用5-Fu后Livin蛋白,Survivin蛋白的表达有增加,运用Quantity-One凝胶成像分析系统分别测定未加用5-Fu,加用5-Fu 24小时,加用5-Fu 48小时Livin蛋白,Survivin蛋白条带吸光度值,P<0.5,说明加用5-Fu对Livin蛋白,Survivin蛋白的表达有显著差异。结论1. Livin,Survivin在肝癌细胞株有表达。2.加用5-Fu后,Livin mRNA,Survivin mRNA及Livin蛋白,Survivin蛋白的表达与未加用5-Fu相比较具有显著的差异。5-Fu可诱导肝癌细胞内livin ,Survivin的表达增加,抵抗化疗药物诱导的细胞凋亡.

论文目录

• 符号说明
• 摘要
• ABSTRACT
• 前言
• 1. 材料与方法
• 1.1 实验材料
• 1.2 实验方法
• 2. 实验结果
• 2.1 总RNA 鉴定
• 2.2 survivin mRNA 的表达情况
• 2.3 survivin 蛋白的表达情况
• 2.4 livin mRNA 的表达情况
• 2.5 livin 蛋白的表达情况
• 2.6 Livin, Survivin mRNA 和蛋白在加药前后的比较
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 文献综述
• 致谢
• 攻读学位期间发表的论文