Bmi1在肝癌组织及肝癌细胞系HepG2中的表达及其与细胞增殖和凋亡的关系

论文摘要

目的:检测Bmi1在肝癌组织与肝癌细胞系中的表达,探讨Bmi1与肝癌增殖与凋亡的关系,为肝癌的诊断、病情评估、治疗及预后提供一个新的思路。方法:采用免疫组织化学EnVision二步法对54例HCC标本及相应癌旁组织以及10例正常肝组织标本的Bmi1基因及Ki67抗原的表达进行了检测,并采用TUNEL法检测了上述标本的凋亡。将构建好的pCMV6-Bmi1载体转染肝癌细胞系HepG2,48h后采用Western blot技术及实时定量PCR对Bmi1的表达情况进行鉴定。并使用流式细胞仪检测转染后细胞的细胞周期与凋亡情况。结果:免疫组化及凋亡检测显示HCC中Bmi1的高表达与年龄、性别、肿瘤大小、肿瘤数目、临床TNM分期、是否有肝硬化及是否有HBsAg感染无显著相关（P>0.05）,但与组织学分级有关,高、中分化组Bmi1表达率显著高于低分化组（P<0.05）。肝癌Bmi1阳性组增殖指数（PI）（50.3±21.4）%显著高于阴性表达组（17.3±7.1）%（P<0.05）,凋亡指数（AI）无明显差异（P>0.05）。Western blot技术及实时定量PCR鉴定结果提示Bmi1蛋白和Bmi1 mRNA在细胞系中过表达,其生长曲线可见pCMV6-Bmi1转染组的HepG2细胞的增殖速度比未转染组和pCMV6空载体转染组细胞显著升高。流式细胞仪检测结果提示pCMV6-Bmi1转染组与pCMV6空载体转染组相比,G2%+S%明显升高,DNA合成增多。加入5-FU作用24h,检测细胞凋亡情况,pCMV6-Bmi1转染组细胞凋亡率明显低于pCMV6空载体转染组。结论:以上的实验提示了Bmi1参与了肝癌细胞增殖的调控,促进了肝癌早期发生和细胞增殖,与细胞凋亡之间的关系未能通过实验证实,推断可能与研究的样本量较少有关,或者它们之间并非一种直接调控的关系,而是多因素参与的过程,有待于进一步的实验和研究。

论文目录

• 缩略语表
• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 文献回顾
• 一、Bmi1 基因的发现及与 PcG 家族的关系
• 二、Bmi1 基因的基本结构与功能
• 第一部分 肝癌、癌旁及正常肝组织中Bmi1 的表达及其与细胞增殖和凋亡的关系
• 1 实验材料
• 2 方法
• 3 结果
• 4 讨论
• 第二部分 Bmi1 基因转染对肝癌细胞系HepG2 的作用
• 1 实验材料
• 2 方法
• 3 结果
• 4 讨论
• 小结
• 参考文献
• 个人简历和研究成果
• 致谢