论文摘要
生理条件下,在体膀胱可记录到起源于膀胱顶,向膀胱颈方向传播的自发性、规律性慢波,推测在膀胱顶存在有起搏细胞;逼尿肌不稳定表现为病理状态下的全膀胱或大部分膀胱组织协调收缩,提示膀胱存在有一个兴奋性最高的控制点(即起搏点)。而离体的膀胱平滑肌肌条在完全阻断了神经影响(切断神经支配以及加入神经阻滞剂)的情况下,仍然存在有节律的自发性收缩。该现象表明离体膀胱平滑肌的收缩不依赖于神经因素而与膀胱平滑肌本身特性有关,是一种由起搏细胞控制的肌源性的自发兴奋、收缩。理论上存在的膀胱起搏细胞目前仍是未解之迷,尚未见明确说法。卡哈尔间质细胞(interstitial cells of Cajal, ICC)在胃肠道的起搏作用和膀胱逼尿肌与胃肠道平滑肌相似的生理特性,为我们探求膀胱起搏细胞提供了一个理想的切入点。采用ICC特异鉴定方法――KIT免疫组织化学染色,KIT阳性、形态与胃肠道ICC相似的ICC样细胞被证实存在于豚鼠和人的膀胱,且推测其可能就是膀胱的起搏细胞。但目前相关研究报道较少,且集中于形态学研究,尚没有ICC样细胞就是膀胱起博细胞的证据。本课题以成年豚鼠为研究对象,在证实ICC样细胞存在于豚鼠膀胱的基础上,采用酶消化法,体外得到培养状态下的ICC样细胞,利用膜片钳技术,在全细胞记录模式下观察其是否具有起博细胞的电流特性,以证明其是否为膀胱的起博细胞。本研究结果将丰富膀胱神经生理理论,对于理解与排尿有关的生理和病理生理机制都会增加全新的认识,并为临床上治疗某些疾病(如DI)提供新的靶点。主要实验结果及结论如下:1.建立了能有效观察膀胱ICC样细胞的免疫组织化学实验方法:采用改良的国外学者制备膀胱铺片方法,通过KIT免疫组织化学染色技术,证实在成年豚鼠膀胱的粘膜下层和逼尿肌肌束边缘存在有ICC样细胞。2.建立了膀胱ICC样细胞体外原代培养方法:采用酶消化法得到原代培养状态下的膀胱ICC样细胞和逼尿肌细胞;采用liberase胶原酶较传统胶原酶可明显缩短成年豚鼠膀胱ICC样细胞和逼尿肌细胞原代培养的组织消化时间。3.体外培养状态下,ICC样细胞和逼尿肌细胞存在明显差别:(1)形态差别:ICC
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