shRNA沉默FAK基因抑制胃癌生长及转移的体内实验研究

论文摘要

目的：研究FAK基因沉默后裸鼠胃癌模型体内肿瘤生长及转移的变化。方法：培育SGC-7901细胞（空白对照组）；转染FAK-shRNA慢病毒载体的SGC-7901细胞（干扰实验组）；转染阴性对照shRNA慢病毒载体的SGC-7901细胞（阴性对照组）；在G418浓度为600ug/ml的条件下筛选获得稳定转染的细胞株；体外用Western Blot方法检测三组细胞FAK蛋白的表达；将裸鼠随机分为6组，采用三组细胞反复传代，接种到裸鼠体内，各建立人胃癌裸鼠皮下移植模型和原位移植模型，观察裸鼠体内肿瘤生长及转移情况；用RT-PCR，免疫组织化学染色检测瘤体FAK的表达情况。结果：1.Western Blot检测，干扰实验组FAK蛋白较阴性对照组、空白对照组明显减少。2.裸鼠皮下移植肿瘤生长大小：干扰实验组（1.474±0.9840g）与阴性对照组（3.134±0.3299g）、空白对照组（2.687±0.3827）比较，差异有统计学意义（P<0.05）;阴性对照组和空白对照组比较，差异无统计学意义；裸鼠原位肿瘤模型体内转移情况：干扰实验组肝脏转移1只，无腹腔转移；阴性对照组肝脏转移6只，腹腔转移4只；空白对照组肝脏转移5只，腹腔转移4只；干扰实验组与阴性对照组和空白对照组有显著统计学差异。3.瘤体RT-qPCR检测，干扰实验组FAK的mRNA明显低于阴性对照组和空白对照组。结论：1.FAK-shRNA能明显抑制胃癌SGC-7901中FAK的表达；2.在裸鼠内体，FAK-shRNA显著降低胃癌裸鼠移植瘤瘤体FAK基因的mRNA转录；3.FAK基因沉默后能抑制裸鼠体内胃癌的生长及远处转移。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 缩略语表
• 前言
• 第一部分 体外实验：稳定 FAK 基因沉默胃癌 SGC-7901 细胞的建立
• 1. 材料
• 1.1 实验材料
• 1.2 主要仪器
• 1.3 主要的试剂
• 1.4 主要试剂的配制
• 2. 实验方法
• 3. Western blot检测FAK蛋白的表达情况
• 结果
• 第二部分 体内试验：RNAi 沉默 FAK 表达对 SGC-7901 细胞增殖及转移的体内实验
• 1.材料
• 1.1 细胞株及实验动物
• 1.2 主要仪器
• 1.3 常用溶液的配制
• 2.实验方法
• 2.1 SGC-7901 细胞常规培养
• 2.2 动物模型的构建
• 2.3 常规生物学实验方法
• 2.4 应用的统计学方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 附图 1
• 致谢
• 综述
• 参考文献