缺血后处理对大鼠肝缺血再灌注后肝细胞Bcl-2、Bax蛋白表达的影响

论文摘要

目的:探讨缺血后处理对大鼠肝缺血再灌注后Bcl-2、Bax蛋白表达的影响及其机制。方法:健康雄性SD大鼠45只,随机分为三组:假手术对照组（S组）、缺血再灌注组（I/R组）、缺血后处理组（IPo组）,每组15只。建立大鼠局部肝脏缺血再灌注模型,IPo组大鼠肝脏在恢复全面血液再灌前给予再灌注10s,缺血10s,反复6次的缺血后处理,三组动物于再灌注后2、4、6h抽取静脉血检测ALT及AST,切取肝组织检测MDA、SOD,制备病理切片在电镜下观察线粒体的超微结构;免疫组织化学法检测肝组织中Bcl-2Bax蛋白的表达。结果:1.与IR组相比,再灌后各时间点IPo组血清ALT、AST水平显著降低（P＜0.01）。2.与IR组相比,再灌后各时间点IPo组肝组织中MDA含量显著降低（P＜0.01）,SOD活性则显著增高（P＜0.05）。3.IPo组再灌后2、4、6h肝组织病理形态学改变轻于IR组。4.IPo组Bcl-2蛋白表达明显高于IR组（P＜0.01）,Bax蛋白表达明显低于IR组（P＜0.01）。结论:Bcl-2、Bax蛋白表达改变参与了肝细胞凋亡及缺血再灌注损伤;缺血后处理可以明显减少肝细胞凋亡,抑制缺血再灌注损伤。肝细胞凋亡的减少与Bcl-2基因蛋白的上调、Bax下调有关。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 前言
• 背景回顾
• 1.肝缺血再灌注损伤的发生
• 2.缺血后处理
• 3.缺血后处理与缺血再灌注损伤
• 3.1 缺血后处理抑制中性粒细胞的活化
• 3.2 减少氧化剂介导的细胞损伤
• 3.3 抑制细胞内及线粒体内钙超载
• 3.4 促进内源性腺苷的释放
• 3.5 促进内源性一氧化氮的释放
• 3.6 激活再灌注损伤补救激酶（RISK）通路,减轻缺血再灌注损伤
• 4.结语
• 材料与方法
• 1.研究对象
• 1.1 动物选择及实验分组
• 1.2 70%肝脏缺血模型的制备
• 2.标本采集和指标测定
• 3.主要试剂与仪器
• 3.1 主要试剂
• 3.2 实验仪器
• 4.石蜡切片的制作及免疫组化染色
• 4.1 取材
• 4.2 脱水固定
• 4.3 包埋
• 4.4 切片
• 4.5 烘烤
• 4.6 HE染色
• 4.7 SP法免疫组化染色
• 5.统计学处理
• 结果
• 1.血清ALT、AST活性变化
• 2.肝组织MDA含量及SOD活性变化
• 3.肝组织Bcl-2染色
• 4.肝组织Bax染色
• 5 透射电镜下肝细胞超微结构的变化
• 讨论
• 1.缺血再灌注所致肝损伤的机理
• 1.1 氧自由基
• 1.2 钙超载
• 1.3 中性粒细胞
• 1.4 Kupffer细胞
• 1.5 一氧化氮（NO）和内皮素（ET）
• 1.6 细胞因子
• 1.7 热休克蛋白
• 1.8 线粒体损伤
• 1.9 T细胞
• 1.10 细胞凋亡
• 1.11 内毒素
• 2.本实验中应用缺血后处理对肝缺血再灌注损伤的保护作用
• 2.1 本实验所选用指标的变化及意义
• 2.2 关于缺血后处理的临床应用及前景
• 结论
• 参考文献
• 攻读硕士学位期间论文发表目录
• 致谢
• 附录1:缩略词
• 附录2:缺血再灌注损伤诱导细胞凋亡的机制及通路
• 附录3:缺血后处理的机制和通路