吡格列酮防治非酒精性脂肪肝病的实验研究

论文摘要

目的：探讨胰岛素抵抗（IR）及肝脏枯否细胞（KCs）异常与大鼠非酒精性脂肪肝病（NAFLD）发生的关系；观察吡格列酮（PIO）防治大鼠NAFLD的疗效；研究PIO防治大鼠NAFLD的作用机制。方法：完全随机法将72只SD大鼠分为6组，每组12只，分别为：8周处死正常对照组（NG8W）、8周处死模型组（FG8W）及吡格列酮预防组（PIO预防组），以上三组于实验第8周处死；12周处死正常对照组（NG12W）、12周处死模型组（FG12W）及吡格列酮治疗组（PIO治疗组），以上三组于实验第12周处死。NG8W和NG12W给予普通饲料，剩余四组给予高脂饲料（普通饲料+14％猪油+1％胆固醇）。PIO预防组于实验第4-8周以PIO10mg·kg-1·d-1灌胃，PIO治疗组于实验第8-12周以PIO10mg·kg-1·d-1灌胃；NG8W和FG8W于实验第4-8周以蒸馏水2mL·d-1灌胃；NG12W和FG12W于实验第8-12周以蒸馏水2mL·d-1灌胃。处死前称体重；每组取SD大鼠8只，行腹主动脉采血，测定空腹血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、甘油三脂（TG）、总胆固醇（TC）、空腹血糖（FPG）、空腹胰岛素（FIns），计算空腹胰岛素抵抗指数（FIRI）；取肝脏并称重，计算肝指数；肝右叶组织病理切片、HE染色，定量分析肝组织脂肪变性面积和炎症活动度。各组剩余4只大鼠用做KCs的分离、鉴定和培养，观察KCs形态变化，测定KCs产生的肿瘤坏死因子-α（TNF-α）及一氧化氮（NO）水平。结果：（1）FG8W和FG12W SD大鼠肝指数、血清ALT、AST、TG、TC、FIns水平、FIRI、肝脏KCs产生的TNF-α及NO水平均高于同期正常对照组，较NG8W及NG12W有差异（p＜0.05）；光镜下可见肝细胞脂肪变性、炎症细胞浸润甚至点状坏死；肝脏KCs体积增大，胞体较厚，细胞易变形及伸出伪足，贴壁较牢固。（2）PIO预防组SD大鼠肝指数、血清ALT、AST、TG、TC、FIns水平、FIRI、肝脏KCs产生的TNF-α和NO水平与FG8W比较均有所下降，较后者有差异（p＜0.05），与NG8W比较无差异（p＞0.05）；光镜下见肝组织结构基本正常，偶见轻微的肝细胞脂肪变性，脂肪变性的肝细胞面积小于1／3，未见炎症及坏死；肝脏KCs形态基本接近NG8W，但细胞体积稍大。（3）PIO治疗组SD大鼠肝指数、血清ALT、AST、TG、TC、FIns水平及FIRI均较FG12W有所下降，与FG12W有差异（p＜0.05），其中肝指数、血清ALT、AST水平仍较高，与NG12W有差异（p＜0.05），而血清TG、TC、FIns水平及FIRI与NG12W比较无差异（p＞0.05）；肝脏KCs产生的TNF-α、NO水平较NG12W有所升高，与后者有差异（p分别为＜0.05），与FG12W比较无差异（p＞0.05）；PIO治疗组肝细胞脂肪变性程度较FG12W有所减轻，仍可见大量炎症细胞浸润和肝细胞气球样变；肝脏KCs胞体薄于FG12W，细胞体积仍较大，形状不规则，有较多伪足伸出且贴壁较牢固。（4）FIRI、KCs产生的TNF-α、NO水平分别与NAFLD肝脏损伤评价指标，即肝脂肪变性评分和炎症活动度计分（HAI）呈正相关。结论：IR及KCs异常可能与NAFLD发生相关；PIO对大鼠NAFLD有预防和治疗作用；PIO预防组对NAFLD发生、发展的逆转作用优于PIO治疗组；PIO防治大鼠NAFLD的机制可能与改善IR、调节血脂和早期抑制KCs异常有关。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 中英文对照表
• 第一章 前言
• 第二章 材料与方法
• 2.1 材料
• 2.1.1 实验动物
• 2.1.2 主要实验用仪器
• 2.1.3 实验用药品与试剂
• 2.2 方法
• 2.2.1 动物的分组与处理方法
• 2.2.2 饲料配制
• 2.2.3 一般情况的观察
• 2.2.4 血标本采集及 ALT、AST、TG、TC、FPG、FIns测定
• 2.2.5 IR程度的评价
• 2.2.6 肝湿重及肝指数测定
• 2.2.7 肝组织病理学观察
• 2.2.8 SD大鼠KCs的分离、培养、鉴定和分泌 TNF-α、NO测定
• 2.2.8.1 SD大鼠 KCs的分离、培养、鉴定
• 2.2.8.2 LPS刺激 KCs分泌 TNF-α及NO水平测定
• 2.2.9 统计学方法
• 第三章 实验结果
• 3.1 一般情况
• 3.2 血清 ALT、AST水平
• 3.3 血清 TG、TC水平
• 3.4 血清 FPG、Ins水平及 HOMA-IR分析
• 3.5 肝组织形态学分析
• 3.6 Kcs形态变化
• 3.7 LPS刺激后 KCs产生 TNF-α、NO水平比较
• 3.8 FIRI、TNF-α、NO水平与非酒精性脂肪肝病变关系分析
• 第四章 讨论
• 4.1 NAFLD大鼠模型构建
• 4.2 IR及KCs异常在NAFLD发病机制中的作用
• 4.3 PIO对 NAFLD的防治疗效
• 第五章 结论
• 参考文献
• 综述
• 致谢