人参须根中人参炔醇的结构确证及对肺癌细胞株A549的诱导分化作用研究

人参须根中人参炔醇的结构确证及对肺癌细胞株A549的诱导分化作用研究

论文摘要

人参(Panax ginseng C. A. Mey),为我国一种名贵中药品种,人参皂苷为其主要活性成分。近年来研究发现,人参根的醚溶主要成分——聚乙炔醇亦具有较广的药理活性,尤其具有显著抗肿瘤活性而备受重视。肺癌,特别是非小细胞肺癌(nonsmall-cell lung cancer)为一种严重危害人类健康的常见病,已成为全球性重要公共卫生问题之一。本论文以人参须根为研究对象,就抗肺癌活性成分人参炔醇的提取工艺、结构确证及标准品标准、含量测定方法、人参总炔醇的β-CD包埋工艺及抗肺癌活性进行了研究,结果如下:1、人参炔醇提取工艺的筛选通过比较有机溶剂提取工艺与超临界CO2提取工艺,结果表明:有机溶剂提取最优工艺为提取温度80℃,15倍量石油醚提取1次,提取时间1h,其中有效成分人参炔醇提取率达0.42‰;超临界CO2萃取最优工艺为萃取温度45℃,夹带剂乙醇浓度为95%(用量为1.2L·kg-1药材),萃取压力为30 MPa,萃取时间80min,人参炔醇提取率为0.45‰。该工艺与采用有机溶剂提取方法比较,具有经济、环保、效率高和成本低的特点。2、人参炔醇成分的结构确证及标准品标准研究经过反复研究,优选出了硅胶G柱层析对化合物A进行分离纯化,硅胶G柱层析与LH-20凝胶柱层析联用对化合物B进行分离纯化;二者经TLC薄层检测均为单一斑点,经HPLC归一化法检测纯度均不低于98.0%;采用上述方法分离纯化获得化合物A和B,经理化性质和波谱技术解析,确定化合物A为人参炔醇(panaxynol),化合物B为人参环氧炔醇(panaxydol);同时根据实验结果及文献数据建立了标准品质量标准草案。3、人参炔醇成分的质量控制方法经过反复试验,筛选出人参须根中人参炔醇、人参环氧炔醇、人参炔醇和人参环氧炔醇的HPLC含量测定方法;筛选出人参须根中人参总炔醇的紫外分光光度计含量测定方法。人参炔醇色谱条件为色谱柱:Elite C18柱(150 mm×4.6 mm,5μm);检测波长:230nm;流动相:乙腈-0.025%磷酸水溶液(70:30);流速:1.0mL·min-1;柱温:室温;人参须根药材中人参炔醇含量为0.42‰;人参环氧炔醇色谱条件为色谱柱:Elite C18柱(150mm×4.6mm,5μm);流动相:乙腈-水(54:46);检测波长:230nm;流速:1.0mL·min-1;柱温:室温;人参须根药材中人参炔醇含量为0.29‰;人参炔醇与人参环氧炔醇同时测定色谱条件为色谱柱: Elite C18柱(150 mm×4.6 mm,5μm);柱温:室温;流动相:乙腈-水梯度洗脱;流速:1.0 mL·min-1;检测波长:230nm;同时测定方法中,人参须根药材中人参炔醇含量为0.42‰,人参环氧炔醇含量为0.29‰;人参总炔醇UV测定条件为TU-1901型紫外分光光度计;检测波长:230nm;人参须根中人参总炔醇含量为0.84‰。4、人参总炔醇β-CD包埋工艺研究通过稳定性试验,得出β-CD对人参总炔醇具有稳定作用。在此基础上以正交设计优化包合物制备工艺,经筛选最佳人参总炔醇的β-CD包合工艺为人参总炔醇与β-CD之比为1:8(W:W)、包合温度70℃,包合时间60min,该工艺操作简单,重复性好,可用于工业化生产。5、人参总炔醇对肺癌细胞株A549的诱导分化作用研究观察了人参总炔醇对肺癌细胞株A549的诱导分化活性。发现人参总炔醇对肺癌细胞株A549有较强抑制作用,具有时间和浓度依耐性。3.12512.5μg·ml-1表现为非细胞毒介导的生长抑制效应,25μg·ml-1以上表现为细胞毒作用。

论文目录

  • 中文摘要
  • ABSTRACT
  • 英文缩写索引
  • 前言
  • 1 人参炔醇提取工艺的筛选
  • 1.1 人参炔醇有机溶剂提取工艺
  • 1.1.1 材料、仪器与方法
  • 1.1.2 实验结果
  • 2 提取工艺'>1.2 人参炔醇超临界CO2提取工艺
  • 1.2.1 材料、仪器与方法
  • 1.2.2 实验结果
  • 1.3 小结与讨论
  • 2 人参炔醇成分的结构确证及标准品标准研究
  • 2.1 人参炔醇成分的分离纯化
  • 2.1.1 材料、仪器与方法
  • 2.1.2 实验结果
  • 2.1.3 小结与讨论
  • 2.2 人参炔醇成分的结构确证及标准品标准
  • 2.2.1 材料、仪器与方法
  • 2.2.2 实验结果
  • 2.2.3 小结与讨论
  • 3 人参炔醇成分的质量控制方法
  • 3.1 人参炔醇的含量测定
  • 3.1.1 材料、仪器与方法
  • 3.1.2 实验结果
  • 3.2 人参环氧炔醇的含量测定
  • 3.2.1 材料、仪器与方法
  • 3.2.2 实验结果
  • 3.3 人参炔醇与人参环氧炔醇的同时测定
  • 3.3.1 材料、仪器与方法
  • 3.3.2 实验结果
  • 3.4 人参总炔醇的含量测定
  • 3.4.1 材料、仪器与方法
  • 3.4.2 实验结果
  • 3.5 小结与讨论
  • 4 人参总炔醇的β-环糊精包埋工艺研究
  • 4.1 稳定性研究
  • 4.1.1 材料、仪器与方法
  • 4.1.2 实验结果
  • 4.2 包埋工艺研究
  • 4.2.1 材料、仪器与方法
  • 4.2.2 实验结果
  • 4.3 小结与讨论
  • 5 人参总炔醇对肺癌细胞株 A549 的诱导分化作用研究
  • 5.1 材料、仪器与方法
  • 5.1.1 仪器
  • 5.1.2 试剂
  • 5.1.3 材料
  • 5.1.4 实验方法
  • 5.2 实验结果
  • 5.2.1 人参总炔醇对A549 的生长抑制作用
  • 5.2.2 人参总炔醇对A549 的半抑制浓度IC50
  • 5.3 小结与讨论
  • 6 结论与展望
  • 参考文献
  • 文献综述
  • 参考文献
  • 致谢
  • 附录
  • 个人简历、在学期间发表的学术论文及取得的研究成果
  • 相关论文文献

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