腰果梨提取物抑菌活性及有效成分初步分离

论文摘要

本文以变异链球菌CICC10387（Streptococcus mutans CICC10387）、唾液链球菌CGMCC1.2498（Streptococcus salivarius CGMCC1.2498）、金黄色葡萄球菌CGMCC1.72 （Staphylococcus aureus CGMCC1.72）、表皮葡萄球菌CBL-R（Staphylococcus epidermidis CBL-R）、表皮葡萄球菌TS5（Staphylococcus epidermidis TS5）、白色念珠菌（Candida albicans）、变形杆菌（Bacillus proteus）、大肠杆菌（Escherichia coli）为供试菌,研究了海南腰果梨提取物的抑菌活性；腰果梨抑菌物质的最佳提取方法；原料干燥方法对抑菌效果的影响；并对提取物中抑菌成分进行了分离和鉴定。结果如下：水浴回流提取腰果梨抑菌活性成分,以抑菌圈直径为指标,从乙酸乙酯、70%丙酮（V/V）、70%甲醇（V/V）、70%乙醇（V/V）、正丁醇、水不同极性溶剂中选择最佳提取剂。试验表明：腰果梨70%乙醇提取物抑菌效果最好,且对金黄色葡萄球菌抑制作用最强,白色念珠菌次之。为了探索不同品种腰果梨（黄色、红色）中抑菌活性物质提取的最佳工艺参数,选择金黄色葡萄球菌、白色念珠菌为指示菌,抑菌圈直径之和为响应值,在单因素试验基础上,以溶剂浓度（体积分数）、提取温度、料液比、提取时间为试验因素,采用中心组合设计进行优化。结果表明：提取腰果梨中抑菌活性成分的最佳工艺参数为,①黄色腰果梨：乙醇体积分数为70%,提取温度85℃,料液比1：13.9,提取时间2.65h；②红色腰果梨：乙醇体积分数为70%,提取温度85℃,料液比1：14.5,提取时间2.44h。验证值为25.2mm与26.2mm,与预测值24.82mm和25.21mm相差不大（δ<5%）。因此,该方法对腰果梨提取条件的优化是可行的,具有实际应用价值。为了研究腰果梨的干燥方法对抑菌效果的影响,本试验选择了60℃热风干燥和真空冻干（冷阱-60℃,气压0.42mbar）两种不同的处理方法。按腰果梨不同品种与处理方法分别进行回流提取、浓缩,并对8株供试菌进行抑菌活性试验。结果表明：对表皮葡萄球菌CBL-R的抑菌效果,腰果梨不同品种与干燥方法之间不存在显著性差异（a=0.05）；对唾液链球菌、表皮葡萄球菌TS5、金黄色葡萄球菌、变形杆菌、变异链球菌的抑制作用,热风干燥处理优于真空冻冷干燥,均存在显著性差异（a=0.05）；对白色念珠菌和大肠杆菌的抑制作用,真空冻干方法明显强于热风干燥,具有显著差异（a=0.05）。从经济成本综合考虑,可以选择对腰果梨进行60℃热风干燥方法处理。通过对提取物进行萃取与硅胶柱色谱分离试验,结果表明：各萃取物中只有乙酸乙酯萃取物（50mg/mL）对金黄色葡萄球菌有抑菌效果,说明抑菌成分主要集中在该萃取相中。将乙酸乙酯萃取物经过硅胶柱层析分离后,对金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径为8.6+0.2mm,较过柱前提高了7.5%。根据物质所具有的特征性反应,定性鉴定结果为：腰果梨提取物中含有的黄酮、酚、蒽醌及其甙类物质。经GC-MS分析得知,在所有检出的化合物中,糠醛衍生物（5-羟甲基-2-糠醛）含量最高,相对峰面积达60.88%,结合相关资料推断该物质是腰果梨提取物中的抑菌功能性成分。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 1 文献综述
• 1.1 植物源抑菌活性物质研究概况
• 1.1.1 具有抑菌活性的植物资源
• 1.1.2 植物中的有效抑菌成分
• 1.1.2.1 萜类和挥发油类
• 1.1.2.2 生物碱、胺类化合物
• 1.1.2.3 芳香族化合物
• 1.1.2.4 其他
• 1.1.3 植物源抑菌活性物质的作用机理
• 1.1.4 抑菌成分提取分离与结构鉴定
• 1.1.5 抑菌试验方法
• 1.1.5.1 纸片扩散法（K-B法）
• 1.1.5.2 管碟法
• 1.1.5.3 打孔法
• 1.1.5.4 平板挖沟法
• 1.1.6 最低抑菌浓度测定方法
• 1.1.6.1 稀释法
• 1.1.6.1.1 试管稀释法
• 1.1.6.1.2 微量稀释法
• 1.1.6.1.3 琼脂平板稀释法
• 1.1.6.1.4 培养液—纸片法
• 1.1.6.2 E试验（E-test）
• 1.1.7 植物源抑菌活性物质的应用前景
• 1.2 腰果梨研究概况
• 1.2.1 腰果及腰果梨生物学特征
• 1.2.2 腰果梨化学成分研究
• 1.2.3 腰果梨综合利用
• 1.3 研究目的和意义
• 1.4 主要研究内容
• 2 材料与方法
• 2.1 试验材料
• 2.1.1 腰果梨
• 2.1.2 供试菌株
• 2.2 主要试剂
• 2.2.1 试验药品
• 2.2.2 主要培养基
• 2.3 主要仪器设备
• 2.4 试验方法
• 2.4.1 腰果梨提取物的制备
• 2.4.2 抑菌活性试验
• 2.4.3 最低抑菌浓度的测定
• 2.4.4 抑菌活性物质提取条件的优化
• 2.4.4.1 单因素试验
• 2.4.4.2 艺参数优化
• 2.4.5 抑菌活性成分的分离
• 2.4.6 抑菌活性成分的粗测
• 2.4.7 抑菌活性成分的GC-MS分析
• 3 结果与分析
• 3.1 不同溶剂提取物对抑菌效果的影响
• 3.2 70%乙醇提取物对供试菌抑菌效果的比较
• 3.3 提取单因素试验
• 3.3.1 溶剂体积分数对抑菌效果的影响
• 3.3.2 提取温度的影响
• 3.3.3 提取料液比的影响
• 3.3.4 提取时间的影响
• 3.3.5 提取pH值的影响
• 3.4 腰果梨抑菌物质提取工艺优化
• 3.5 优化后提取物的抑菌效果
• 3.6 腰果梨冻干粉提取物的抑菌效果
• 3.7 最低抑菌浓度的测定
• 3.7.1 腰果梨提取液的MIC值
• 3.7.2 腰果梨提取浸膏的MIC值
• 3.8 抑菌活性物质的分离
• 3.8.1 不同萃取物的抑菌作用
• 3.8.2 乙酸乙酯萃取物各组分的抑菌作用
• 3.9 活性成分初步鉴定
• 3.10 GC-MS成分分析
• 4 讨论
• 4.1 供试菌的选择
• 4.2 抑菌活性物质的提取
• 4.3 抑菌活性物质的分离与鉴定
• 4.3.1 抑菌活性物质的分离
• 4.3.2 抑菌活性物质的鉴定
• 5 结论及展望
• 参考文献
• 个人简历
• 致谢