论文摘要
目的: AF1q基因是急性白血病中与MLL基因形成融合基因的一个主要成员,其定位于1q21,在CD34+的造血干/祖细胞中高表达,在外周血细胞中低表达或不表达。研究发现AF1q基因表达水平可能与恶性血液病的治疗效果及预后有密切关系。ILP-2是新发现的凋亡抑制蛋白家族（ inhibitor of apoptosis proteins,IAP）中的成员之一,是caspase-9的抑制因子,主要通过中和Smac功能而行使其抗凋亡作用。研究表明ILP-2在骨髓增生异常综合征高表达,但在白血病中的研究目前仍较局限。Smac （second mitochodria-derived activator of caspase, Smac）是一种线粒体促凋亡基因,通过解除凋亡抑制蛋白对Caspase-3,-7,-9的抑制作用,释放活化的Caspase而诱导凋亡。本研究旨在检测AF1q及ILP-2与Smac mRNA在白血病中表达并分析其临床意义。方法1研究对象:本课题的研究对象包括100例急性白血病（acute leukemia,AL）（64例初治急性白血病,6例复发患者和30例持续完全缓解期）患者;16例慢性髓细胞白血病（chronic myeloid leukemia,CML）（慢性期9例,加速期5例,急变期2例）患者;20名健康人为正常对照（normal control,NC）组。64例初治急性白血病患者中急性髓系白血病（acute myelogenous leukemia, AML）48例,FAB分型: M211例、M315例、M410例、M59例、M63例;急性淋巴细胞白血病（acute lymphoblastic leukemia, ALL）患者16例（均为L2型）。2采用半定量RT-PCR检测骨髓或外周血单个核细胞AF1q基因、ILP2与Smac mRNA表达水平。结果1各组中AF1q mRNA表达情况1.1 AF1q mRNA在急性白血病中表达情况64例急性白血病（AL）初治组患者中44例表达AF1q mRNA,阳性表达率为68.8%,表达范围为0-0.8687,平均水平为0.2188。正常对照组（NC）阳性表达率仅为15.0%,表达范围为0-0.2032,平均水平为0.0208。AL组表达水平明显高于对照组,差别有统计学意义（P<0.05）。48例急性髓系白血病（AML）患者中35例表达AF1q mRNA,阳性表达率为72.9%,表达范围为0-0.8687,平均水平为0.2266。16例急性淋巴细胞白血病（ALL）患者中9例表达AF1q mRNA,阳性表达率为56.3%,表达范围为0-0.5221,平均水平为0.1953。AML组表达水平高于ALL组,但两组间差别无统计学意义（P>0.05）。两组表达水平均高于NC组,差别有统计学意义（P<0.05）。6例复发组患者中5例表达AF1q mRNA,阳性表达率为83.3%,表达范围为0-0.9458,平均水平为0.3517。明显高于NC组,差别有统计学意义（P<0.05）,也高于AL组,但与AL组差别无统计学意义（P>0.05）。30例持续完全缓解（CCR）组患者11例表达AF1q mRNA,阳性表达率为36.7%,表达范围为0-0.3675,平均水平为0.0763,低于AL组且差别显著（P<0.05）,高于NC组但差别无统计学意义（P>0.05）。依据FAB分型M2、M3、M4、M5、M6、L2亚型间AF1q mRNA表达水平有差别,在M6中表达水平较其他亚型高,但各亚型间差别无统计学意义（P>0.05）。1.2 AF1q mRNA在慢性髓细胞白血病中表达情况慢性髓细胞白血病慢性期（CP）患者AF1q阳性表达率为66.7%,表达范围为0-0.3562,平均水平为0.2031,高于正常对照（NC）组且差别有统计学意义（P<0.05）。加速期和急变期患者（AP和BP）阳性表达率为71.4%,表达范围为0-0.5010,平均水平为0.2598,高于NC组,差别显著（P<0.05）。AP和BP组表达水平高于CP组,但差别无统计学意义（P>0.05）。1.3 AF1q mRNA表达情况与急性白血病疗效的关系64例新近诊断AL患者中45例可进行疗效评估。24例AF1q mRNA阳性（AF1q+ ）表达患者经诱导缓解治疗仅13例获完全缓解,完全缓解率54.17%,21例AF1q mRNA阴性（AF1q- ）表达患者中19例获完全缓解,完全缓解率90.48%,AF1q阴性患者组缓解率高于AF1q阳性患者组,进行卡方检验分析,两组缓解率差别有统计学意义（χ2= 7.188,P<0.01）。2各组中ILP-2 mRNA表达情况2.1 ILP-2 mRNA在急性白血病中表达情况64例急性白血病（AL）初治组患者中39例表达ILP-2 mRNA,阳性表达率为60.9%,表达范围为0-1.1157,平均水平为0.2842。正常对照组（NC）阳性表达率为20%,表达范围为0-0.1168,平均水平为0.0112。AL组表达水平明显高于NC组,差别有统计学意义（P<0.05）。48例急性髓系白血病（AML）患者中27例表达ILP-2 mRNA,阳性表达率为56.3%,表达范围为0-1.1157,平均水平为0.2577。16例急性淋巴细胞白血病（ALL）患者中12例表达ILP-2 mRNA,阳性表达率为75.0%,表达范围为0-1.0357,平均水平为0.3638。ALL组表达水平高于AML组,但差别无统计学意义（P>0.05）。AML组和ALL组表达水平均高于NC组且差别显著（P值均小于0.05）。6例复发组患者中5例表达ILP-2 mRNA,阳性表达率为83.3%,表达范围为0-0.7231,平均水平为0.4612,高于NC组差别显著（P<0.05）,也高于AL组,但与AL组相比差别无统计学意义（P>0.05）。CCR组阳性表达率33.3%（10/30）,表达范围为0-0.5617,平均水平为0.0727,低于AL组且差别有统计学意义（P<0.05）,高于NC组,但差别无统计学意义（P>0.05）。ILP-2 mRNA在M2、M3、M4、M5、M6、L2各亚型间表达水平也有差别,在M6中表达水平较其他亚型高,但各亚型间差别无统计学意义（P>0.05）。2.2 ILP-2 mRNA在慢性髓细胞白血病中表达情况慢性髓细胞白血病慢性期（CP）患者ILP-2阳性表达率为55.6%,表达范围为0-0.5372,平均水平为0.2298,高于NC组差别显著（P<0.05）。加速期和急变期患者（AP和BP）阳性表达率为57.1%,表达范围为0-0.9494,平均水平为0.4292,高于NC组,差别有统计学意义（P<0.05） ,也高于CP组,但差别无统计学意义（P>0.05）。2.3 ILP-2 mRNA表达情况与急性白血病疗效的关系64例新近诊断AL患者中45例可进行疗效评估。19例ILP-2阳性（ILP-2+）表达患者经诱导缓解治疗仅8例完全缓解,缓解率42.11%;26例ILP-2阴性（ILP-2-）表达患者组中有24例完全缓解,完全缓解率92.31%,ILP-2-组患者的缓解率明显高于ILP-2+组,且两组差别有统计学意义（χ2=13.468,P<0.01）。3各组中Smac mRNA表达情况3.1 Smac mRNA在急性白血病中表达情况64例初治急性白血病（AL）患者中46例表达Smac mRNA,阳性表达率为71.9%,表达范围为0-1.5638,平均水平为0.4852。正常对照组（NC）阳性表达率仅15.0%,表达范围为0-0.0258,平均水平为0.0025。AL组表达水平明显高于NC组差别显著（P<0.05）。急性髓系白血病（AML）患者组阳性表达率为72.9%,表达范围为0-1.5638,平均水平为0.4969,急性淋巴细胞白血病（ALL）患者组阳性表达率为68.8%,表达范围为0-0.9493,平均水平为0.4621,AML组高于ALL组,但差别无统计学意义（P>0.05）。AML组和ALL组表达水平均高于NC组（P值均小于0.05）。复发组阳性率为83.3%,表达范围为0-1.3780,平均水平为0.5929,明显高于NC组（P<0.05）,也高于AL组,但与AL组相比差别无统计学意义（P>0.05）。持续完全缓解（CCR）组阳性率为30.0%,表达范围为0-0.9908,平均水平为0.2177,明显低于AL组（P<0.05）,但高于NC组,且差别有显著性（P<0.05）。Smac mRNA在M2、M3、M4、M5、M6、L2亚型间表达水平差别也无统计学意义（P>0.05）,但在M6中表达水平较其他亚型稍高。3.2 Smac mRNA在慢性髓细胞白血病中表达情况慢性髓细胞白血病慢性期（CP）患者Smac mRNA阳性表达率为44.4%,表达范围为0-0.9875,平均水平为0.4031,高于NC组差别有统计学意义（P<0.05）。加速期和急变期患者（AP和BP）阳性表达率为57.1%,表达范围为0-1.3921,平均水平为0.5981,明显高于NC组（P<0.05）,但与CP组差别无统计学意义（P>0.05）。3.3 Smac mRNA表达情况与急性白血病疗效的关系45例可进行疗效评估的AL患者中,20例Smac mRNA阳性（Smac+）患者组经诱导缓解治疗9例完全缓解,缓解率仅45.00%,25例Smac mRNA阴性（Smac-）患者组23例完全缓解,缓解率92.00%, Smac阴性患者组缓解率明显高于Smac阳性患者组的缓解率,两组差别有统计学意义（χ2=11.557,P<0.01）。4急性白血病患者ILP-2与Smac mRNA相关性检验直线相关分析表明在新近诊断AL患者组ILP-2 mRNA表达水平与Smac mRNA表达水平呈正相关（r=0.2605, P<0.01）。并且在研究两者与急性白血病缓解率关系时发现13例ILP-2 +Smac+组患者仅5例完全缓解,缓解率38.46%,15例ILP-2 -Smac-组患者全部缓解,缓解率100%,明显高于ILP-2 +Smac+组患者（χ2=13.062, P<0.01）。6例复发组病人仅1例经联合化疗后再次获完全缓解,其余5例ILP-2与Smac表达阳性,均未获完全缓解。结论1急性白血病初治组患者AF1q mRNA表达水平明显高于正常对照组和急性白血病缓解组。复发组表达水平明显高于正常对照组和缓解组,复发组表达水平高于初治组,但两者差别不显著。AF1q mRNA阳性表达的急性白血病患者完全缓解率明显低于AF1q mRNA阴性表达的急性白血病患者。提示AF1q参与急性白血病的发生与发展,其高表达提示预后不良易复发。2急性白血病初治组患者ILP-2 mRNA表达水平明显高于正常对照组。复发组表达水平明显高于正常对照组和缓解组。ILP-2 mRNA阴性表达的急性白血病患者完全缓解率明显高于ILP-2 mRNA阳性表达的急性白血病患者。提示ILP-2是急性白血病发生与发展的重要因素,其高表达可导致对化疗药物敏感性低,从而降低了白血病的缓解率。3急性白血病初治组患者Smac mRNA表达水平也明显高于正常对照组,复发组表达水平明显高于正常对照组。Smac mRNA阴性急性白血病患者完全缓解率明显高于Smac mRNA阳性急性白血病患者。提示机体细胞癌变时Smac会表现代偿性升高,促凋亡基因Smac是通过拮抗ILP-2功能而实现其促凋亡作用。4 Smac mRNA表达水平与ILP-2呈正相关,ILP-2 mRNA高表达患者Smac表达水平也较高。提示ILP-2通过中和Smac功能而行使其抗凋亡作用诱导机体细胞癌变,同时Smac以拮抗ILP-2的作用来实现其促凋亡作用。因此,ILP-2高表达时Smac亦相应的增高,二者在功能上有密切联系。5慢性髓细胞白血病慢性期、加速/急变期患者AF1q、ILP-2与Smac mRNA表达水平均高于正常对照组（P<0.05）,且加速/急变期表达水平高于慢性期,但差别无统计学意义（P>0.05）。