本文主要研究内容
作者纪伟（2019）在《HCV和HBV的特异性T细胞免疫反应和分子机制研究》一文中研究指出：丙型肝炎是由丙型肝炎病毒(hepatitis Cvirus,HCV)引起的一种主要经血液传播的传染病,呈世界性流行。根据世界卫生组织报告,全球丙型肝炎的流行率平均为3%,估计有1.7亿人感染丙型肝炎病毒,每年新增感染者300万-400万例,死亡25万例,占所有传染病死因的第10位。丙型肝炎已经成为困扰全球公共卫生的一个重要问题。目前,由于HCV基因的多样性以及缺乏理想的动物和细胞感染模型,HCV疫苗研究仍面临很多难题。T细胞免疫在急性HCV感染中病毒是否能自发清除起到关键作用。研究表明,在自限性HCV感染的患者或黑猩猩中发生了强烈的HCV特异性CD8+T细胞应答,但在慢性感染的宿主中观察到较弱CD8+T细胞应答。为了探究T细胞在HCV感染自然进程中的特征,及T细胞免疫与疾病进程的相关性,我们招募河北省某村因献血感染HCV的聚集性人群为研究对象,其中的HCV感染者是1970-1990年左右因献血感染,没有接受过任何治疗。我们用NS3蛋白overlapping多肽库体外刺激PBMC,通过流式分析T细胞细胞因子分泌、记忆细胞分型及抑制性分子表达等,探究T细胞免疫在HCV病毒清除组和慢性感染组的特征及差异。结果表明,病毒清除组的CD8+T和CD4+T细胞因子分泌能力显著高于慢性感染组和健康对照组。两组HCV特异性CD8+T细胞主要以效应性记忆T细胞(TEM)和效应性T细胞为主(TEMRA),而HCV特异性CD4+T细胞主要以效应性记忆T细胞(TEM)和中心记忆T细胞(TCM)为主。在抑制性分子的表达分析中,慢性感染者病毒特异性CD8+T细胞抑制受体的表达以PD-1高、TIM-3高表达为主要特征,其与以AST或ALT水平异常和形态病理学变化为特征的肝损伤相关。有趣的是,LAG-3在慢性感染者CD8+T细胞上的表达较低,与ALT或AST呈负相关。我们对长时期的HCV感染者的病毒特异性T细胞免疫的特征进行了研究,并有助于阐明免疫应答在相关临床过程中的作用。同时,我们也对慢性感染者感染的HCV病毒进行了分子水平的研究工作。我们对其感染的HCV病毒通过分子生物学实验进行基因分型,并利用一代测序和二代测序手段获得26条全基因组序列。根据基因分型结果,这些感染者感染的是HCV1b(17)、HCV2a(9)两种基因型。对于一代测序的全基因序列,我们根据MEGA7.0的进化距离分析发现,HCV1b间及HCV2a间的序列都有很高的同源性。通过与国内外序列进行系统发育进化树分析,HCV2a的序列相对聚集,聚集在一个独立的分支上,与国外测得的NDM228等株亲缘关系相对较近。HCV1b的17条序列相对分散。对各蛋白编码区也进行了系统进化分析,结果同全基因序列的分析基本一致。通过二代测序,我们获得的信息有原始reads、拼接序列、每条序列每个位点的测序深度、entropy、mut_rate等。26条序列的拼接工作已经完成,数据分析还在进行中。我们在病毒“准种”、重要的T细胞表位和中和抗体表位的免疫逃逸突变等角度进行分析,结合临床数据,探究其与肝脏损伤程度的相关性。另外,MHC分子结构在T细胞免疫研究中起了很重要的作用。MHC分子可以限制TCR对多肽的识别,而且多肽与MHC之间的构象协调作用对于TCR的识别至关重要。如果将构像改变的关键氨基酸突变,就会导致pMHC复合物与TCR的结合变弱。同一 MHC-多肽可以被不同TCR识别,MHC-多肽复合物的柔性变化也是TCR可以交叉识别的原因之一。可以看出,MHC-多肽的结合能力以及它们的构象变化影响了TCR识别。我们通过对H-2Kd-HBV peptide复合物分子结构的分析,并结合HLA-B*4001的结构解析及分析,发现两个复合物结构中都有在一个带正电的氨基酸R和负电氨基酸E构成的两种不同形式的盐桥参与MHC与多肽的结合。我们对两个氨基酸进行了单突变和双突变,通过refolding、CD检测MHC与多肽结合的稳定性,以及H-2Kdtetramer对HBV特异性CD8+T的识别,结果证明了盐桥氨基酸的突变影响了多肽与MHC分子的结合能力及多肽-MHC复合物对TCR的识别。综上所述,本研究探究了 T细胞免疫在HCV感染自然进程中的特征和T细胞免疫与肝脏损伤程度的相关性,并对感染者感染的HCV病毒全序列进行了分析。另外,我们基于H-2Kd-HBV peptide HBc87-95和 HLA-B*4001-SARS N216-225复合物结构发现了盐桥在MHC与多肽结合及MHC-多肽复合物对TCR识别的重要性。该研究工作对HCV和HBV的预防和治疗具有一定的提示性和指导性。
Abstract
bing xing gan yan shi you bing xing gan yan bing du (hepatitis Cvirus,HCV)yin qi de yi chong zhu yao jing xie ye chuan bo de chuan ran bing ,cheng shi jie xing liu hang 。gen ju shi jie wei sheng zu zhi bao gao ,quan qiu bing xing gan yan de liu hang lv ping jun wei 3%,gu ji you 1.7yi ren gan ran bing xing gan yan bing du ,mei nian xin zeng gan ran zhe 300mo -400mo li ,si wang 25mo li ,zhan suo you chuan ran bing si yin de di 10wei 。bing xing gan yan yi jing cheng wei kun rao quan qiu gong gong wei sheng de yi ge chong yao wen ti 。mu qian ,you yu HCVji yin de duo yang xing yi ji que fa li xiang de dong wu he xi bao gan ran mo xing ,HCVyi miao yan jiu reng mian lin hen duo nan ti 。Txi bao mian yi zai ji xing HCVgan ran zhong bing du shi fou neng zi fa qing chu qi dao guan jian zuo yong 。yan jiu biao ming ,zai zi xian xing HCVgan ran de huan zhe huo hei xing xing zhong fa sheng le jiang lie de HCVte yi xing CD8+Txi bao ying da ,dan zai man xing gan ran de su zhu zhong guan cha dao jiao ruo CD8+Txi bao ying da 。wei le tan jiu Txi bao zai HCVgan ran zi ran jin cheng zhong de te zheng ,ji Txi bao mian yi yu ji bing jin cheng de xiang guan xing ,wo men qiao mu he bei sheng mou cun yin suo xie gan ran HCVde ju ji xing ren qun wei yan jiu dui xiang ,ji zhong de HCVgan ran zhe shi 1970-1990nian zuo you yin suo xie gan ran ,mei you jie shou guo ren he zhi liao 。wo men yong NS3dan bai overlappingduo tai ku ti wai ci ji PBMC,tong guo liu shi fen xi Txi bao xi bao yin zi fen bi 、ji yi xi bao fen xing ji yi zhi xing fen zi biao da deng ,tan jiu Txi bao mian yi zai HCVbing du qing chu zu he man xing gan ran zu de te zheng ji cha yi 。jie guo biao ming ,bing du qing chu zu de CD8+The CD4+Txi bao yin zi fen bi neng li xian zhe gao yu man xing gan ran zu he jian kang dui zhao zu 。liang zu HCVte yi xing CD8+Txi bao zhu yao yi xiao ying xing ji yi Txi bao (TEM)he xiao ying xing Txi bao wei zhu (TEMRA),er HCVte yi xing CD4+Txi bao zhu yao yi xiao ying xing ji yi Txi bao (TEM)he zhong xin ji yi Txi bao (TCM)wei zhu 。zai yi zhi xing fen zi de biao da fen xi zhong ,man xing gan ran zhe bing du te yi xing CD8+Txi bao yi zhi shou ti de biao da yi PD-1gao 、TIM-3gao biao da wei zhu yao te zheng ,ji yu yi ASThuo ALTshui ping yi chang he xing tai bing li xue bian hua wei te zheng de gan sun shang xiang guan 。you qu de shi ,LAG-3zai man xing gan ran zhe CD8+Txi bao shang de biao da jiao di ,yu ALThuo ASTcheng fu xiang guan 。wo men dui chang shi ji de HCVgan ran zhe de bing du te yi xing Txi bao mian yi de te zheng jin hang le yan jiu ,bing you zhu yu chan ming mian yi ying da zai xiang guan lin chuang guo cheng zhong de zuo yong 。tong shi ,wo men ye dui man xing gan ran zhe gan ran de HCVbing du jin hang le fen zi shui ping de yan jiu gong zuo 。wo men dui ji gan ran de HCVbing du tong guo fen zi sheng wu xue shi yan jin hang ji yin fen xing ,bing li yong yi dai ce xu he er dai ce xu shou duan huo de 26tiao quan ji yin zu xu lie 。gen ju ji yin fen xing jie guo ,zhe xie gan ran zhe gan ran de shi HCV1b(17)、HCV2a(9)liang chong ji yin xing 。dui yu yi dai ce xu de quan ji yin xu lie ,wo men gen ju MEGA7.0de jin hua ju li fen xi fa xian ,HCV1bjian ji HCV2ajian de xu lie dou you hen gao de tong yuan xing 。tong guo yu guo nei wai xu lie jin hang ji tong fa yo jin hua shu fen xi ,HCV2ade xu lie xiang dui ju ji ,ju ji zai yi ge du li de fen zhi shang ,yu guo wai ce de de NDM228deng zhu qin yuan guan ji xiang dui jiao jin 。HCV1bde 17tiao xu lie xiang dui fen san 。dui ge dan bai bian ma ou ye jin hang le ji tong jin hua fen xi ,jie guo tong quan ji yin xu lie de fen xi ji ben yi zhi 。tong guo er dai ce xu ,wo men huo de de xin xi you yuan shi reads、pin jie xu lie 、mei tiao xu lie mei ge wei dian de ce xu shen du 、entropy、mut_ratedeng 。26tiao xu lie de pin jie gong zuo yi jing wan cheng ,shu ju fen xi hai zai jin hang zhong 。wo men zai bing du “zhun chong ”、chong yao de Txi bao biao wei he zhong he kang ti biao wei de mian yi tao yi tu bian deng jiao du jin hang fen xi ,jie ge lin chuang shu ju ,tan jiu ji yu gan zang sun shang cheng du de xiang guan xing 。ling wai ,MHCfen zi jie gou zai Txi bao mian yi yan jiu zhong qi le hen chong yao de zuo yong 。MHCfen zi ke yi xian zhi TCRdui duo tai de shi bie ,er ju duo tai yu MHCzhi jian de gou xiang xie diao zuo yong dui yu TCRde shi bie zhi guan chong yao 。ru guo jiang gou xiang gai bian de guan jian an ji suan tu bian ,jiu hui dao zhi pMHCfu ge wu yu TCRde jie ge bian ruo 。tong yi MHC-duo tai ke yi bei bu tong TCRshi bie ,MHC-duo tai fu ge wu de rou xing bian hua ye shi TCRke yi jiao cha shi bie de yuan yin zhi yi 。ke yi kan chu ,MHC-duo tai de jie ge neng li yi ji ta men de gou xiang bian hua ying xiang le TCRshi bie 。wo men tong guo dui H-2Kd-HBV peptidefu ge wu fen zi jie gou de fen xi ,bing jie ge HLA-B*4001de jie gou jie xi ji fen xi ,fa xian liang ge fu ge wu jie gou zhong dou you zai yi ge dai zheng dian de an ji suan Rhe fu dian an ji suan Egou cheng de liang chong bu tong xing shi de yan qiao can yu MHCyu duo tai de jie ge 。wo men dui liang ge an ji suan jin hang le chan tu bian he shuang tu bian ,tong guo refolding、CDjian ce MHCyu duo tai jie ge de wen ding xing ,yi ji H-2Kdtetramerdui HBVte yi xing CD8+Tde shi bie ,jie guo zheng ming le yan qiao an ji suan de tu bian ying xiang le duo tai yu MHCfen zi de jie ge neng li ji duo tai -MHCfu ge wu dui TCRde shi bie 。zeng shang suo shu ,ben yan jiu tan jiu le Txi bao mian yi zai HCVgan ran zi ran jin cheng zhong de te zheng he Txi bao mian yi yu gan zang sun shang cheng du de xiang guan xing ,bing dui gan ran zhe gan ran de HCVbing du quan xu lie jin hang le fen xi 。ling wai ,wo men ji yu H-2Kd-HBV peptide HBc87-95he HLA-B*4001-SARS N216-225fu ge wu jie gou fa xian le yan qiao zai MHCyu duo tai jie ge ji MHC-duo tai fu ge wu dui TCRshi bie de chong yao xing 。gai yan jiu gong zuo dui HCVhe HBVde yu fang he zhi liao ju you yi ding de di shi xing he zhi dao xing 。
论文参考文献
论文详细介绍
论文作者分别是来自中国疾病预防控制中心的纪伟，发表于刊物中国疾病预防控制中心2019-09-19论文，是一篇关于细胞免疫论文,识别论文,盐桥论文,中国疾病预防控制中心2019-09-19论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自中国疾病预防控制中心2019-09-19论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。
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