论文摘要
目的:探讨农达（41%草甘膦）对人L-02肝细胞产生的损伤作用及其可能的机制。方法:体外试验（in vitro test）以L-02肝细胞为受试细胞,通过MTT法检测不同浓度的农达对L-02肝细胞存活率的影响,选择细胞存活率为20%-80%的浓度进行后续实验。设置5个农达处理组,60mg/L、90mg/L、120mg/L、150mg/L、180mg/L和1个阴性对照组（PBS）,农达处理细胞时间为24h。L-02肝细胞的形态学改变采用姬母萨染色法在光镜下观察结合透射电镜观察;农达对L-02肝细胞膜通透性影响和细胞毒性作用采用谷草转氨酶（AST）、谷丙转氨酶（ALT）活性水平结合台盼蓝拒染法来评价;农达诱导L-02肝细胞氧化损伤程度选用超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、谷胱甘肽（GSH）含量等指标评价;用线粒体跨膜电位（△Ψm）检测细胞线粒体损伤;用DNA条带（DNA-Ladder）检测肝细胞DNA损伤;以AnnexinV-FITC/PI复染法测定细胞发生凋亡和坏死的情况;Western Blotting检测对照组与90mg/L组细胞色素C（Cyt C）和凋亡诱导因子（AIF）表达水平。结果:1.在60～180mg/L的处理浓度范围内,能明显引起L-02肝细胞存活率的降低（P＜0.05）,处理浓度和细胞存活率之间存在负相关（r=-0.974）。2.在光镜下观察姬母萨染色L-02肝细胞爬片,观察到各农达处理组L-02肝细胞皱缩或肿大,形态由瓦片状收缩为圆形,细胞间隙扩大,细胞破裂,染色质浓缩,贴壁细胞密度和数量减少。电镜下观察,可发现处理组细胞出现表面微绒毛消失,细胞膜结构不完整,细胞核碎裂或肿胀,线粒体空泡样变等细胞凋亡或坏死的表现。3.农达处理L-02肝细胞,其活细胞台盼兰蓝染比例升高（P＜0.05）;细胞培养上清液中ALT活性增加（P＜0.05）;从90mg/L组开始AST活性增加（P＜0.05）;农达导致处理组细胞内MDA的含量增加,SOD活性减弱,GSH含量减少（P＜0.05）;农达导致120～180mg/L组细胞Na+-K+ ATP酶活性降低（P＜0.05）。4.农达处理能诱导细胞DNA链断裂,处理浓度在150mg/L、180mg/L,DNA受损程度严重;90mg/L组Cyt C和AIF表达水平高于对照组（P＜0.05）;90mg/L组开始用农达处理的L-02细胞线粒体膜电位明显降低（P＜0.05）;农达能明显诱导处理组肝L-02细胞发生凋亡和坏死（P＜0.05）,随着处理农度的增高,细胞凋亡和坏死的比例增高,但是在180mg/L组凋亡比例下降。结论:农达在60mg/L～180mg/L范围内,能引起L-02肝细胞存活率下降,细胞膜通透性增加,抑制细胞离子转运,诱发DNA损伤,线粒体膜电位降低,Cyt C、AIF等凋亡因子泄漏,使细胞产生凋亡和坏死,对肝细胞具有明显的损伤作用;其损伤的作用机制可能与农达导致肝细胞氧化损伤、线粒体崩溃等途径有关。