论文摘要
目的:观察氧化应激后Hsp90作为分子伴侣对大鼠VSMC p-ERK1/2作用,以及它对CyPA和CAV-1与p-ERK1/2相互作用的影响。 方法:为观察氧化应激后细胞内Hsp90蛋白表达变化及ERK1/2的活化,实验取培养的4～10代大鼠VSMC,用1цM LY83583处理不同时间（control,5min,10min,30min,60min,90min,120 min,180min）,收集细胞总蛋白,用WB检测细胞内Hsp90,ERK1/2和p-ERK1/2。 为观察Hsp90是否可以作为分子伴侣对p-ERK1/2作用,实验分为4组:control（PBS处理120 min）、LY（1цM LY83583处理120min）、Gel+DMSO+LY（先用5цM LY83583预处理30min,再用1цM LY83583处理120min）、DMSO+LY(先用10-6DMSO预处理30min,再用1цM LY83583处理120min),收集细胞总蛋白,用Hsp90一抗免疫沉淀,WB检测p-ERK1/2;再分别收集细胞总蛋白、可溶性蛋白、不溶性蛋白和核蛋白,WB直接检测p-ERK1/2的变化;免疫荧光检测4组细胞中细胞核内p-ERK1/2的变化。 实验还用WB检测了细胞内CyPA和CAV-1在LY83583处理不同时间后蛋白表达的变化;p-ERK1/2的一抗免疫沉淀control、LY、Gel+DMSO+LY、DMSO+LY 4组细胞总蛋白,以观察CyPA和CAV-1在氧化应激后与p-ERK1/2的结合,以及Gel阻断Hsp90后对CyPA和CAV-1与p-ERK1/2的结合的影响。
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