猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5基因疫苗免疫原性的研究

猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5基因疫苗免疫原性的研究

论文摘要

本研究将猪繁殖与呼综合征病毒ORF5基因疫苗(pcDNA-PRRSV-ORF5)免疫BALB/c小鼠、仔猪和将猪白细胞介素-2真核表达质粒(pcDNA-IL-2)与pcDNA-PRRSV-ORF5联合免疫BALB/c小鼠后,采用流式细胞仪(FACS)、淋巴细胞增殖试验(MTT法)及间接ELISA试验分别对宿主的体液免疫和细胞免疫进行了检测。 将pcDNA-PRRSV-ORF5以不同免疫途径(基因枪和肌肉注射)免疫BALB/c小鼠,检测小鼠的外周血中CD4-、CD8-T淋巴细胞数、T淋巴细胞的转化功能及小鼠血清中特异性PRRSV血清抗体IgG动态变化。结果表明,pcDNA-PRRSV-ORF5基因疫苗免疫小鼠后外周血对ConA有明显的反应性。实验组与对照组比较差异极显著(P<0.01)或显著(P<0.05),CD4-T淋巴细胞数在免疫后7d高于对照组(P<0.01),CD8-T淋巴细胞在免疫后28d高于对照组,不同途径基因疫苗免疫小鼠后均诱导小鼠产生PRRSV特异性IgG。在诱导细胞免疫方面,基因枪和肌肉注射各组间无明显差异;在诱导体液免疫方面,基因枪法优于肌肉注射。表明制备的pcDNA-PRRSV-ORF5基因疫苗免疫小鼠能够诱导其机体产生良好的体液和细胞免疫应答,基因枪法较肌肉注射更能诱导体液免疫应答的产生。 将pcDNA-PRRSV-ORF5以50μg、100μg和200μg三种剂量肌注免疫BALB/c小鼠,检测小鼠的外周血中CD4-、CD8-T淋巴细胞数、T淋巴细胞的转化功能及小鼠血清中特异性PRRSV血清抗体IgG动态变化。结果表明,三个剂量的pcDNA-PRRSV-ORF5基因疫苗免疫小鼠后外周血都对ConA有明显的反应性,实验组与对照组比较差异极显著(P<0.01)或显著(P<0.05),CD4-T淋巴细胞数在免疫后7d高于对照组(P<0.01),CD8-T淋巴细胞在免疫后28d高于对照组,不同剂量pcDNA-PRRSV-ORF5基因疫苗免疫小鼠后均诱导小鼠产生PRRSV特异性IgG,大剂量基因疫苗免疫小鼠的体液免疫和细胞免疫应答高于中、小剂量。表明pcDNA-PRRSV-ORF5免疫小鼠能够诱导其机体产生良好的体液和细胞免疫应答,并表现一定的剂量依赖性。 将pcDNA-PRRSV-ORF5和pcDNA-PRRSV-ORF5的联合免疫BALB/c小鼠,采用流式细胞仪(FACS)、淋巴细胞增殖试验(MTT法)及间接ELISA试验分别对其细胞免疫和体液免疫进行了检测。结果表明,pcDNA-IL-2与pcDNA-PRRSV-ORF5联合免疫小鼠后抗体水平和细胞免疫水平明显高于单独pcDNA-PRRSV-ORF5免疫,联合组与单独pcDNA-PRRSV-ORF5组比较有显著差异(P<0.01)。表明猪pcDNA-IL-2能够显著增强pcDNA-PRRSV-ORF5诱导小鼠体液免疫和细胞免疫的能力。 将pcDNA-PRRSV-ORF5以肌肉注射免疫仔猪,结果表明,pcDNA-PRRSV-ORF5基因疫苗免疫仔猪后外周血对ConA有明显的反应性,实验组与对照组比较差异极显著(P<0.01)或显著(P<0.05),CD4-T淋巴细胞数高于对照组,差异极显著(P<0.01),CD8-T淋巴细胞数在免疫仔猪后第7d和第75d差异不显著(P>0.05),在第15d至第60d差异极显著(P<0.01),pcDNA-PRRSV-ORF5基因疫苗免疫仔猪后诱导仔猪产生了PRRSV特异性抗体,与空载体及空白对照组相比,差异极显著(P<0.01)。表明pcDNA-PRRSV-ORF5基因疫苗能够诱导仔猪产生良好的体液和细胞免疫应答,免疫期持续135d以上。

论文目录

  • 摘要
  • ABSTRACT
  • 前言
  • 1 材料与方法
  • 1.1 实验材料
  • 1.2 实验方法
  • 2 实验结果
  • 2.1 PRRSV ORF5基因疫苗免疫小鼠后的实验结果
  • 2.2 PRRSV ORF5基因疫苗免疫仔猪后的实验结果
  • 3 讨论
  • 3.1 PRRSV与基因疫苗
  • 3.2 小鼠和仔猪免疫pcDNA-PRRSV-ORF5基因疫苗后外周血 T淋巴细胞转化效果
  • +T淋巴细胞数动态变化'>3.3 小鼠和仔猪免疫pcDNA-PRRSV-ORF5基因疫苗后 CD4+T淋巴细胞数动态变化
  • +T淋巴细胞数动态变化'>3.4 小鼠和仔猪免疫pcDNA-PRRSV-ORF5基因疫苗后CD8+T淋巴细胞数动态变化
  • 3.5 小鼠和仔猪免疫pcDNA-PRRSV-ORF5基因疫苗后血清抗体IgG的动态变化
  • 3.6 免疫途径对pcDNA-PRRSV-ORF5基因疫苗免疫效果的影响
  • 3.7 免疫剂量对pcDNA-PRRSV-ORF5基因疫苗免疫效果的影响
  • 3.8 免疫佐剂(pcDNA-IL-2)对pcDNA-PRRSV-ORF5基因疫苗免疫效果的影响
  • 3.9 基因疫苗的作用机理
  • 3.10 基因疫苗研究的意义及展望
  • 4 结论
  • 参考文献
  • 致谢
  • 附录:主要试剂配方
  • 攻读学位期间发表的学术论文目录
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