CYP2A6基因多态性与烟草代谢物相关性冠心病的关系

论文摘要

目的:探讨CYP2A6*1、*2、*3、*4型基因多态性与烟草代谢物相关性冠心病的关系;探索一种简便快速的优化PCR条件的方法。方法:采用关联分析,严格按照标准对湖南地区汉族人群随机选取,其中冠心病患者（CHD）205例[吸烟者（SM）129例,不吸烟者（NS）76例],正常（NC）对照208例（吸烟者78例,不吸烟者130例）。用均匀设计对影响PCR反应的4个因素进行优化,应用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性分析（PCR-RFLP）对四组对象的CYP2A6基因型分布频率进行分析。结果:（1）优化的PCR反应条件为:退火温度61.2℃,模板50ng,镁离子1.5mmol/L,Taq酶1.5U。（2）正常对照组与冠心病组中CYP2A6四种基因型的分布均符合Hardy-Weinberg平衡定律（对照组X2=3.62,P＞0.05;冠心病组X2=1.06,P＞0.05）,所选人群具有代表性。两组对象CYP2A6基因型的分布频率无显著性差异。（3）吸烟组与不吸烟组中CYP2A6四种基因型的分布均符合Hardy-Weinberg平衡定律（对照组X2=0.32,P＞0.05;冠心病组X2=0.63,P＞0.05）,所选人群具有代表性。吸烟组中CYP2A6*1的分布频率大于不吸烟组（SM:93.72%VS NS:87.86%,P＜0.05 X2=4.24）,不吸烟组中CYP2A6*4分布频率大于吸烟组（SM:5.31%VS NS:10.68%,P＜0.05 X2=4.04）;吸烟组冠心病发病率大于不吸烟组（SM:62.93%VS NS:37.07%,X2=28.76,P＜0.01）。结论:（1）均匀设计是优化PCR反应条件的有力工具。（2）CYP2A6基因多态性可能是影响个人吸烟行为的一个重要因素。（3）吸烟者与不吸烟者的冠心病发病率有显著差异,吸烟是冠心病发病的一个危险因素。（4）CYP2A6基因多态性与烟草代谢物相关性冠心病可能相关。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 课题来源
• 中英文词汇对照
• 第一章 前言
• 第二章 材料和方法
• 2.1 材料
• 2.1.1 研究对象
• 2.1.2 标本
• 2.1.3 主要试剂
• 2.1.3.1 基因组DNA提取试剂的配制
• 2.1.3.2 其他试剂
• 2.1.4 主要仪器设备
• 2.2 方法
• 2.2.1 一般临床资料的收集
• 2.2.1.1 个人资料的调查
• 2.2.1.2 生物化学指标的测定
• 2.2.2 外周血基因组DNA的提取
• 2.2.3 DNA完整性的鉴定
• 2.2.4 DNA的浓度和纯度测定
• 2.2.5 基因组DNA PCR扩增
• 2.2.5.1 序列分析与引物设计
• 2.2.5.2 均匀设计优化PCR条件
• 2.2.5.3 PCR扩增
• 2.2.6 1%琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物
• 2.2.7 PCR产物限制性酶切消化
• 2.2.7.1 CYP2A6产物限制性内切酶Xcm I消化
• 2.2.7.2 CYP2A6产物限制性内切酶Dde I消化
• 2.2.8 8%聚丙烯酰胺凝胶电泳检测酶切产物
• 2.2.9 统计学分析
• 第三章 结果
• 3.1 一般临床资料比较
• 3.1.1 冠心病组和对照组一般临床资料的比较
• 3.1.2 吸烟组和不吸烟组一般临床资料的比较
• 3.2 CYP2A6基因exon3扩增
• 3.2.1 均匀设计法优化CYP2A6基因PCR反应条件
• 3.2.2 图像分析软件Quantity One 4.62分析CYP2A6均匀实验结果
• 3.2.3 扩增CYP2A6基因
• 3.3 CYP2A6基因RFLP分析
• 3.3.1 用限制性内切酶XCM I进行分析
• 3.3.2 用限制性内切酶Dde I进行分析
• 3.4 统计学分析
• 3.4.1 冠心病组与对照组CYP2A6基因型频率的比较
• 3.4.2 吸烟组与不吸烟组CYP2A6基因型频率和冠心病发病率的比较
• 第四章 讨论
• 4.1 均匀设计用于PCR反应条件的优化
• 4.2 CYP2A6与冠心病
• 4.3 被动吸烟与冠心病
• 4.4 问题与展望
• 第五章 结论
• 第六章 参考文献
• 第七章 综述
• 致谢
• 攻读学位期间主要的研究成果