扇贝多肽对UVA氧化损伤人真皮成纤维细胞和无毛小鼠皮肤的保护作用机制

论文摘要

目的 探讨在长波紫外线（UVA）辐射下,扇贝多肽（PCF）对人真皮成纤维细胞和昆明种无毛小鼠皮肤氧化损伤的保护作用机制。方法 采用海洋酶生物工程技术,从栉孔扇贝中提取PCF,Mr=912。建立UVA对体外培养的人真皮成纤维细胞和昆明种无毛小鼠皮肤氧化损伤的病理模型,辐射强度为:细胞1.905J/cm2;小鼠4556.4J/cm2。细胞实验设计分为6组:对照组,UVA模型组,UVA+PCF1组（PCF浓度为2.74mM）,UVA+PCF2组（PCF浓度为5.48mM）,UVA+PCF3组（PCF浓度为10.96mM）,和UVA+VitC组（VitC浓度为5.68mM）。MTT法检测细胞活性;测定胞浆超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-px）、过氧化氢酶（CAT）、黄嘌呤氧化酶（XOD）活性和活性氧（ROS）、丙二醛（MDA）含量以及细胞抗超氧阴离子能力（A-SAC）、总抗氧化能力（T-AOC）;流式细胞仪Annexin V-FITC法测定细胞的凋亡率和死亡率;以Fluo-3-AM为荧光染料,测定细胞内游离[Ca2+]i;rhodamine 123为荧光染料,测定线粒体膜电位（ΔψM）;透射电镜观察细胞超微结构的改变;彗星电泳法检测DNA链断裂的程度（辐射强度为9.114J/cm2）。动物实验设计分为对照组,UVA模型组,UVA+5%PCF组,UVA+20%PCF组,UVA+10%VitC组。免疫组化法测定皮肤p53基因蛋白表达、表皮生长因子受体（EGFR）表达以及P物质的含量。结果 在UVA辐射情况下1.PCF能显著提高成纤维细胞的活性;提高胞浆中SOD,GSH-px的活性,同时可降低XOD的活性;降低ROS、MDA含量,提高A-SAC及T-AOC,且在2.74-10.96mM的浓度范围内呈量效关系,而不影响CAT的活性;降低成纤维细胞的凋亡率和死亡率;减少成纤维细胞内游离[Ca2+]i;稳定线粒体的膜电位;2.彗星电泳表明PCF组DNA链断裂较UVA模型组明显减轻。3.免疫组化结果表明PCF可以抑制小鼠表皮细胞突变型p53基因和EGFR的表

论文目录

• 引言
• 第一章 实验材料
• 1 试剂
• 2 实验用皮肤和动物
• 3 仪器设备
• 第二章 实验方法
• 1 细胞实验
• 2 动物实验
• 3 统计学处理
• 第三章 实验结果
• 1 细胞实验结果
• 2 动物实验结果
• 第四章 讨论
• 第五章 结论
• 第六章 参考文献
• 综述及参考文献
• 附录
• 攻读学位期间的研究成果
• 致谢
• 学位论文独创性声明、学位论文知识产权权属声明