去细胞结合染料介导的光氧化技术处理同种异体小静脉的性能研究

论文摘要

目的：对兔颈静脉采用不同的去细胞及光氧化处理方案,探讨较理想的同种异体小静脉去细胞光氧化处理方法,了解此种方法制备的可行性。建立异体兔颈动脉置换模型,对去细胞结合光氧化交联处理的兔颈静脉进行体内研究,评价其作为冠状动脉旁路搭桥术中异体血管来源的可行性。方法：将130根新鲜兔颈静依据不同去细胞处理方案分为去细胞组（Ⅱ-ⅩⅢ组）和新鲜血管对照组（Ⅰ组）。通过HE染色评价细胞成分去除程度,探讨较理想的去细胞方案。取较理想的去细胞方案行进一步光氧化,将40根新鲜兔颈静脉分为新鲜血管组（F0组）,去细胞光氧化1小时组（DP1h组）,去细胞结合光氧化2小时组（DP2h组）及去细胞结合光氧化3小时组（DP3h组）共4组（n=10）。通过Masson染色、热皱缩温度、抗张强度、含水量测定,探讨较理想的光氧化处理方案。比较去细胞光氧化处理的兔颈静脉与深低温-玻璃化及戊二醛处理的兔颈静脉的在体性能。采用清洁级纯种兔50只,随机分为去细胞光氧化处理组（DP组）,深低温-玻璃化法保存组（CP组）,戊二醛保存组（GA组）以及假手术组（F组）共4组（n=15）。建立异体兔颈动脉置换模型（n=50）,以普通饲料外加华法林抗凝饲养观察。在术后2周、4周、8周通过颈动脉彩超检查评价各组血管的通畅情况及血流动力学情况。每次屠宰移植血管已闭塞的实验动物,8周时统一处死所有实验动物。通过形态学观察、HE染色、免疫组织化学方法评价各组血管在体内循环系统中的生物稳定性及内膜增生情况；通过扫描电镜比较各组血管的内皮化程度,评价血管重塑情况。结果：去细胞静脉HE染色显示：经0.5%曲那通X—100 6h+0.025%胰蛋白酶/0.02%EDTA 10min+20u/mlDNase-I及0.2mg/ml RNase-A 6h处理的兔颈静脉与新鲜血管最为相似；Masson染色显示去细胞后血管胶原结构稀疏,组织松散,光氧化后组织结构变得紧凑（以光氧化处理2小时组最明显）；机械性能逐渐恢复,光氧处理化2小时与新鲜血管最为相似（P>0.05）。异体兔颈动脉置换术后各组血管均无瘤样扩张,术后8周移植静脉累计通畅率：F组100%,GA组0%,DP组86.7%,CP组28.6%。HE染色、扫描电镜检测显示：GA组未见内皮细胞再生,胶原变性,大量炎性细胞浸润；CP组团块状内皮细胞逐渐长入,散在分布,炎性细胞浸润；DP组管道内壁内皮细胞覆盖较好,内皮化程度较高,有新生血管形成,胶原结构保持完好；Ⅷ因子染色显示GA组未见内皮细胞生长；CP组少量散在内皮细胞分布,细胞排列紊乱；DP组内皮覆盖广泛,细胞生长良好。PCNA染色显示DP组阳性细胞表达率明显低于CP组（P<0.05）,CP组明显低于GA组（P<0.05）。结论：1.采用多步骤去垢剂-酶消化法（0.5%曲那通X-1006h,0.025%胰蛋白酶/0.02%EDTA 10min和20u/mlDNase-I及0.2mg／mlRNase-A 6h）去细胞结合光氧化处理2小时是处理同种异体小静脉较理想的方案。2.去细胞结合染料介导的光氧化反应处理的兔颈静脉行兔颈动脉置换,血流动力学性能良好,抗血栓能力强,生物稳定性及组织相容性好,,利于体内的内皮化,内皮化程度较高。3.去细胞结合染料介导的光氧化技术有望成为比较理想的组织工程小口径血管（直径<6mm）移植替代物用于去除免疫原性,增强组织稳定性、生物稳定性和机械性能的方案。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 第一章 前言
• 第二章 材料与方法
• 2.1 实验材料和仪器
• 2.2 实验方法
• 2.3 标本采集
• 2.4 观察指标
• 2.5 统计分析
• 第三章 结果
• 3.1 体外性能检测
• 3.2 在体性能检测
• 第四章 讨论
• 第五章 结论
• 附图
• 参考文献
• 综述
• 致谢
• 攻读学位期间主要的研究成果