生物指纹谱分析方法研究中药提取物和DNA的相互作用

论文摘要

中药提取物中多种活性成分和生物大分子之间的相互作用研究在中药活性成分筛选以及中药药理的建立中具有重要意义,也是中药现代化研究中的热点和难点之一。本论文首次提出了中药生物指纹谱的概念,并建立了一系列以高效液相色谱为核心的方法,实现了中药提取物中多种活性成分和生物大分子相互作用的同时定性和定量分析。建立了微透析/高效液相色谱方法,并用于中药提取物中多种活性成分和DNA分子的相互作用研究。从中药黄连、黄柏和苦参的提取物中筛选出包括小檗碱、巴马汀和药根碱在内的7种活性成分。通过这种方法还测定了这3种化合物和DNA的结合常数并研究了它们对DNA的竞争相互作用。建立了离心超滤样品预处理/高效液相色谱方法,用于定量分析中药提取物中多种活性成分对DNA结构和序列选择性。通过这种方法从中药黄连和大黄的提取物中共筛选出18种活性成分,并定量分析了它们对DNA的结构及序列选择性。制备了新型固定化DNA色谱固定相,并成功应用于中药提取物的一维和二维高效液相色谱分析以及亲和固相萃取。应用这种固定相进行了中药活性成分筛选,复杂中药提取物中活性成分的纯化,以及中药提取物的二维生物色谱分析等方面的研究。应用以上色谱方法,对中药延胡索中的天然消旋化合物四氢巴马汀与DNA的相互作用进行了研究,并发现它的（+）对映体对B构型DNA具有更强的结合能力。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 文献综述
• 1.1 引言
• 1.2 中药活性成分的筛选方法
• 1.2.1 整体动物模型
• 1.2.1.1 经典的动物模型
• 1.2.1.2 血清药理学
• 1.2.2 组织器官模型
• 1.2.3 细胞水平模型
• 1.2.4 分子水平模型
• 1.3 中药筛选中的色谱方法
• 1.3.1 反相液相色谱
• 1.3.2 生物色谱（Biochromatography）
• 1.3.2.1 固定化血浆蛋白质生物色谱
• 1.3.2.2 生物膜色谱
• 1.3.2.3 二维生物色谱
• 1.4 药物-靶点相互作用表征中的分离分析方法
• 1.4.1 以膜分离为基础的相互作用表征技术
• 1.4.1.1 平衡透析和超滤技术
• 1.4.1.2 微透析技术
• 1.4.2 基于液相色谱法的相互作用表征技术
• 1.4.3 毛细管电泳及电色谱方法
• 1.5 药物-DNA 相互作用
• 参考文献
• 第二章 微透析/高效液相色谱法应用于中药提取物与DNA相互作用的生物指纹谱分析
• 2.1 引言
• 2.2 实验部分
• 2.2.1 试剂与材料
• 2.2.2 仪器设备
• 2.2.3 中药提取物的制备
• 2.2.4 微透析取样
• 2.2.5 回收率的测定
• 2.2.6 高效液相色谱分析
• 2.2.7 紫外-可见光谱分析
• 2.3 结果与讨论
• 2.3.1 回收率
• 2.3.2 工作曲线
• 2.3.3 方法可行性的考察
• 2.3.4 结合率的定义和计算
• 2.3.5 微透析/高效液相色谱法用于中药提取物的生物指纹谱分析
• 2.3.6 紫外-可见光谱分析
• 2.3.7 中药提取物中多种活性化合物与DNA 结合率的计算
• 2.4 微透析/高效液相色谱法应用于中药活性成分和 DNA 结合常数的测定和竞争相互作用的研究
• 2.4.1 小檗碱、巴马汀、药根碱与小牛胸腺 DNA 结合常数的测定
• 2.4.2 药物对DNA 竞争相互作用的研究
• 2.5 结论
• 参考文献
• 第三章 离心超滤/高效液相色谱-质谱联用方法应用于中药提取物和 DNA 相互作用的生物指纹谱分析
• 3.1 引言
• 3.2 实验部分
• 3.2.1 试剂与材料
• 3.2.2 仪器设备
• 3.2.3 中药提取物的制备
• 3.2.4 离心超滤取样及DNA 结构选择性实验
• 3.2.5 高效液相色谱-质谱分析
• 3.2.6 回收率的测定
• 3.3 结果与讨论
• 3.3.1 基于离心超滤/高效液相色谱方法的中药生物指纹谱分析
• 3.3.2 离心超滤/高效液相色谱与微透析/高效液相色谱方法的中药生物指纹谱分析定量结合率的比较
• 3.3.3 中药大黄提取物的生物指纹谱分析
• 3.3.4 中药大黄中与DNA 相互作用的活性成分的质谱分析
• 3.3.5 离心超滤/高效液相色谱法研究中药活性成分与 DNA 的结构及序列选择性结合
• 3.4 结论
• 参考文献
• 第四章 固定化DNA 亲和固定相的制备及在中药生物指纹谱分析中的应用
• 4.1 固定化DNA 亲和固定相的制备及评价
• 4.1.1 引言
• 4.1.2 实验部分
• 4.1.2.1 试剂与材料
• 4.1.2.2 仪器设备
• 4.1.2.3 中药提取物的制备
• 4.1.2.4 固定化DNA 亲和固定相的制备
• 4.1.3 结果与讨论
• 4.1.3.1 DNA 的超声处理
• 4.1.3.2 DNA 的固定化原理
• 4.1.3.3 固定化DNA 固定相的评价
• 4.1.3.4 流动相组成对保留的影响
• 4.1.4 小结
• 4.2 固定化DNA 亲和固定相在中药成分及中药提取物的分析中的应用
• 4.2.1 引言
• 4.2.2 实验部分
• 4.2.3 结果与讨论
• 4.2.3.1 中药提取物在固定化DNA 亲和固定相上的分离
• 4.2.3.2 顶替色谱研究中药成分与DNA 相互作用的活性机理
• 4.2.3.3 前沿色谱测定中药成分与DNA 的结合常数
• 4.2.4 小结
• 4.3 固定化DNA 亲和固定相在固相萃取（SPE）中的应用
• 4.3.1 引言
• 4.3.2 实验部分
• 4.3.2.1 试剂与材料
• 4.3.2.2 仪器设备
• 4.3.2.3 中药提取物的制备
• 4.3.2.4 固定化DNA 亲和固定相的制备
• 4.3.2.5 固相萃取纯化富集大黄提取物
• 4.3.3 结果与讨论
• 4.3.4 小结
• 4.4 固定化DNA 亲和固定相在二维液相色谱生物指纹谱分析中的应用.
• 4.4.1 引言
• 4.4.2 实验部分
• 4.4.2.1 试剂与材料
• 4.4.2.2 中药提取物的制备
• 4.4.2.3 固定化DNA 亲和固定相的制备
• 4.4.2.4 二维液相色谱-质谱系统
• 4.4.3 结果与讨论
• 4.4.3.1 大黄提取物的全二维液相色谱分析
• 4.4.3.2 大黄提取物的离线二维液相色谱-质谱分析
• 4.4.4 小结
• 4.5 结论
• 参考文献
• 第五章 生物指纹谱分析在手性化合物四氢巴马汀与DNA 相互作用研究中的应用
• 5.1 引言
• 5.2 实验部分
• 5.2.1 试剂与材料
• 5.2.2 仪器设备
• 5.2.3 中药延胡索提取物的制备
• 5.2.4 高效液相色谱分析
• 5.3 结果与讨论
• 5.3.1 延胡索中四氢巴马汀的存在形式
• 5.3.2 消旋四氢巴马汀的微透析/高效液相色谱分析
• 5.3.3 消旋四氢巴马汀的DNA 亲和色谱分析
• 5.3.4 四氢巴马汀对映体对小牛胸腺DNA 的结合常数的测定
• 5.3.5 四氢巴马汀对映体对DNA 结构的选择性
• 5.4 结论
• 参考文献
• 作者简介
• 攻读博士学位期间发表的论文及申请的专利
• 致谢